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尛苳苳

金虫 (初入文坛)

[求助] 羧甲基茯苓多糖的灭菌问题 已有3人参与

实验室有羧甲基茯苓多糖,想进一步实验,但是要灭菌,试过用0.22μm和0.45μm的滤头,但是会堵住,高温灭菌又会破坏多糖请教各位有什么好的办法,用紫外灯可行吗?
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maomao851119

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
xiaoxiao270: 金币+1, 3Q 2015-09-22 14:56:58
那就要看你灭菌后的产品要做什么用途了   如果对无菌要求根高的话   紫外线灭菌肯定不够的  尤其对液体

灭菌嘛   无非就几种方法  你的产品是液体 既然湿热不行的话  最好的就是过滤了

你说滤头会堵   原因是什么?   1  产品本身黏度很大? 2 产品浓度很大?  3 产品菌体太多?
4 里面杂质太多?

如果是1,2    稀释--过滤--管式超滤浓缩    对环境和操作要求挺高
如果是3,4   高速离心--0.8--0.45--0.22    可能对样品损耗比较大
如果实在不行的话   co-60照射吧   估计对样品影响会很大   我们之前有个类似的  做过 不行
2楼2015-09-22 10:19:51
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尛苳苳

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by maomao851119 at 2015-09-22 10:19:51
那就要看你灭菌后的产品要做什么用途了   如果对无菌要求根高的话   紫外线灭菌肯定不够的  尤其对液体

灭菌嘛   无非就几种方法  你的产品是液体 既然湿热不行的话  最好的就是过滤了

你说滤头会堵   原因 ...

感谢您的解答,我问题没有描述详细。实验室的多糖是固体粉末,后面想做一下细胞毒理方面的实验,所以要灭下菌。滤头堵了的原因我想一是粘度很大,再一个就是多糖本身颗粒大。用紫外照射多糖粉末这样来灭菌可行吗?谢谢
3楼2015-09-22 10:48:50
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maomao851119

新虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
xiaoxiao270: 金币+5, 3Q 2015-09-22 14:57:06
引用回帖:
3楼: Originally posted by 尛苳苳 at 2015-09-22 10:48:50
感谢您的解答,我问题没有描述详细。实验室的多糖是固体粉末,后面想做一下细胞毒理方面的实验,所以要灭下菌。滤头堵了的原因我想一是粘度很大,再一个就是多糖本身颗粒大。用紫外照射多糖粉末这样来灭菌可行吗? ...

我明白了   你现在其实还没确定是直接将多糖固体直接灭菌  还是溶解后变成液体再灭菌是不?

你之前说  高温灭菌会对他造成破坏   你这个只是做细胞毒理试验  我能不能理解为只要这个样品里面活的微生物就行了?
那么你这个样品在多高的温度会被破坏 ?   破坏率是多高?  被破坏的样品(相当于杂质)对细胞毒理有没影响?  这些基础数据应该要有的
一般灭菌条件都是121摄氏度 -8--10分钟  你的试验条件可以选择一个远低于这个条件的灭菌方式   比如说100度  1h  等等  如果你担心灭菌不彻底   可以细胞培养的时候加点双抗?
至于说是直接粉末灭菌 还是溶解后再灭菌   个人觉得是粉末直接灭菌的好  毕竟液体还存在一个热穿透问题

另外  我之前做过一个多糖产品  分子量达到150万  溶解后非常黏  但是他有个特性 在一定盐浓度存在的条件下  他的黏度会立即下降很多  不知道你这个多糖也存在这个情况 不妨试一下   溶解后加入2%左右浓度的氯化钠  看看他的黏度有没下降  如果有的话  过滤肯定会好很多  当然  这必须是在不影响你后面的细胞毒理试验的前提下

紫外照射灭菌 这个词本身就不对   紫外照射根本不能称之为灭菌  充其量只能叫作消毒吧
4楼2015-09-22 12:53:58
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xiaoying1995

木虫 (初入文坛)

做细胞毒一般浓度都不会很大,所以样品溶解后过滤可以除菌。

发自小木虫Android客户端
5楼2015-09-22 15:28:45
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18944605597

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
我们学校最近用了超滤技术,听工程师说有不同的孔径。很多做蛋白的都在用。你可以试试
6楼2015-09-22 21:35:35
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maomao851119

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

我们学校最近用了超滤技术,听工程师说有不同的孔径。很多做蛋白的都在用。你可以试
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超滤技术  除菌  理论上可行   但是对整体操作要求很高且费用不小   并且要除菌  就必须保证超滤膜本身就是无菌的 光这一点就很头疼

除非是那种一次性的超滤管   并且只能是截流细菌  你的多糖透出
7楼2015-09-23 09:37:01
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lateron_cq

新虫 (初入文坛)

最后同学用哪种方法灭菌的?

发自小木虫IOS客户端
8楼2021-07-11 14:13:19
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脂质体

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

超滤技术不能用于除菌!建议用水溶解稀释,可以用10-1um滤膜进行粗滤,再用0.45um滤膜预过滤,最后再用0.22um滤膜进行除菌过滤
9楼2021-07-12 12:07:04
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