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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 荧光定量PCR 预变性时间、加入引物的反应体系保存
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江漓湄best

金虫 (小有名气)

[交流] 荧光定量PCR 预变性时间、加入引物的反应体系保存 已有6人参与

本人刚开始学习做定量PCR实验过程中遇到两个问题：
1）使用的是TOYOBO SYBR  本来是95℃预变性1min,由于粗心，程序设定成95℃，10min，这么一来，对Ct值的影响大不大？需要重做吗/
2）将引物，SYBR，无酶水按比例配成反应体系，能不能置于-20℃冰箱保存1-2天?
在网上浏览了下，说法不一，还请大神给出宝贵的知道意见，谢谢了！
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1楼 2015-09-20 17:57:26
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然处

金虫 (小有名气)
★
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预变性十分钟没多大问题，混样把引物和染料混一块还是有点不妥。

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江漓湄best
迷茫会结束的
2楼2015-09-20 19:42:55
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江漓湄best

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 然处 at 2015-09-20 19:42:55
预变性十分钟没多大问题，混样把引物和染料混一块还是有点不妥。

嗯嗯，非常感谢
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3楼2015-09-20 22:55:13
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haze12344

银虫 (小有名气)
★
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一般是不加好放，因为燃料都是很遇光就降解的，要避光保存的东西。每次现配现用最好
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生物你好
4楼2015-09-21 11:16:56
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Mis_Q

银虫 (小有名气)
★
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做实验难道不进行重复验证吗？
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5楼2015-09-21 15:17:12
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大海一孤舟

铜虫 (小有名气)
★
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预变性10分钟，将会降低酶活；使得PCR效率变低，影响后续的计算；

引物与染料混合放置1-2天，没有什么问题
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6楼2015-09-21 17:00:58
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫
★
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预变性10min?看你是什么酶，如果不是热启动型的酶，那就有问题，酶活没有保障，扩增会有非特异性条带，如果是热启动酶或热启动型的高保真酶就没有问题，因为热启动酶的酶活需要预变性10min才能激活~下面那个最好不要混合放-20吧
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-09-22 09:44:55
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阿里郎爱阿里

铜虫 (正式写手)
★
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95℃，10min问题不是很大，但反应体系最好还是加完后马上做，若实在有急事，可放4℃1-2h，问题也不大。
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8楼2015-09-23 10:52:22
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