24小时热门版块排行榜    

查看: 4614  |  回复: 7

江漓湄best

金虫 (小有名气)

[交流] 荧光定量PCR 预变性时间、加入引物的反应体系保存 已有6人参与

本人刚开始学习做定量PCR实验过程中遇到两个问题:
1)使用的是TOYOBO SYBR  本来是95℃预变性1min,由于粗心,程序设定成95℃,10min,这么一来,对Ct值的影响大不大?需要重做吗/
2)将引物,SYBR,无酶水按比例配成反应体系,能不能置于-20℃冰箱保存1-2天?
在网上浏览了下,说法不一,还请大神给出宝贵的知道意见,谢谢了!
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

然处

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
预变性十分钟没多大问题,混样把引物和染料混一块还是有点不妥。

发自小木虫Android客户端

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

迷茫会结束的
2楼2015-09-20 19:42:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江漓湄best

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 然处 at 2015-09-20 19:42:55
预变性十分钟没多大问题,混样把引物和染料混一块还是有点不妥。

嗯嗯,非常感谢
3楼2015-09-20 22:55:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

haze12344

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般是不加好放,因为燃料都是很遇光就降解的,要避光保存的东西。每次现配现用最好
生物你好
4楼2015-09-21 11:16:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Mis_Q

银虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
做实验难道不进行重复验证吗?
5楼2015-09-21 15:17:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

大海一孤舟

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
预变性10分钟,将会降低酶活;使得PCR效率变低,影响后续的计算;

引物与染料混合放置1-2天,没有什么问题
6楼2015-09-21 17:00:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
预变性10min?看你是什么酶,如果不是热启动型的酶,那就有问题,酶活没有保障,扩增会有非特异性条带,如果是热启动酶或热启动型的高保真酶就没有问题,因为热启动酶的酶活需要预变性10min才能激活~下面那个最好不要混合放-20吧
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-09-22 09:44:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

阿里郎爱阿里

铜虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
95℃,10min问题不是很大,但反应体系最好还是加完后马上做,若实在有急事,可放4℃1-2h,问题也不大。
8楼2015-09-23 10:52:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 江漓湄best 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见