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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 单链核酸跑PAGE电泳
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傅煜雯2007

金虫 (小有名气)

[求助] 单链核酸跑PAGE电泳 已有3人参与

单链核酸,长度24bp 跑PAGE电泳  选择什么样的loading buffer ? 胶浓度选择多少合适呢？电压，时间多少呢？分子生物学小白一个，各位大神帮帮忙！
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1楼 2015-09-16 21:46:27
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bugakbug

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
TBE buffer (89 mM Tris–borate, 2 mM EDTA, pH 8.3)
12%  polyacrylamide  gel  electrophoresis
160 V for 40 min at 4 °C.  (10 cm×10.5 cm×0.75 mm)

ddH2O                                            6.0 ml
40% (19:1) acrylamine:bis-acrylamine   3.6 ml
5x TBE buffer                                  2.4 ml
10% APS                                        200  ul
TEMED                                             10 ul
Total                                            ~ 12   ml
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傅煜雯2007
2楼2015-09-17 00:14:18
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傅煜雯2007

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bugakbug at 2015-09-17 00:14:18
TBE buffer (89 mM Tris–borate, 2 mM EDTA, pH 8.3)
12%  polyacrylamide  gel  electrophoresis
160 V for 40 min at 4 °C.  (10 cm×10.5 cm×0.75 mm)

ddH2O                                          ...

谢谢啦！再问下，检测的时候用什么染色呢？还有，四度怎么做到呢？有特殊电泳仪吗？

发自小木虫IOS客户端
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3楼2015-09-17 00:36:40
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bugakbug

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
傅煜雯2007: 金币+25, ★★★很有帮助 2015-09-17 22:55:12
SyBR Green stain DNA or RNA,
gel stain can be detected by UV transilluminator

Bio-Rad  Mini-Protein III  
http://www.artisantg.com/Scienti ... ni_Protean_III_Cell
This vertical gel electrophoresis tank can be put into an refrigerator.

Run the gel under 4 °C in order to avoid the DNA or RNA conformation change during High voltage electrophoresis.
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4楼2015-09-17 01:05:33
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kobe199613

木虫之王 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
傅煜雯2007: 金币+5, ★有帮助 2015-09-17 22:55:44
关于4度的问题，通常是将电泳槽放入4度冰箱中。

发自小木虫Android客户端
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【招聘】医用高分子材料研发工程师（北京）
5楼2015-09-17 01:21:43
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
傅煜雯2007: 金币+5, ★有帮助 2015-09-17 22:56:08
单链的跑尿素变性page吧，用甲酰胺loading buffer，分子克隆上有详细介绍。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
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6楼2015-09-17 05:20:53
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