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傅煜雯2007

金虫 (小有名气)

[求助] 单链核酸跑PAGE电泳 已有3人参与

单链核酸,长度24bp 跑PAGE电泳  选择什么样的loading buffer ? 胶浓度选择多少合适呢?电压,时间多少呢?分子生物学小白一个,各位大神帮帮忙!
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bugakbug

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
TBE buffer (89 mM Tris–borate, 2 mM EDTA, pH 8.3)
12%  polyacrylamide  gel  electrophoresis
160 V for 40 min at 4 °C.  (10 cm×10.5 cm×0.75 mm)

ddH2O                                            6.0 ml
40% (19:1) acrylamine:bis-acrylamine   3.6 ml
5x TBE buffer                                  2.4 ml
10% APS                                        200  ul
TEMED                                             10 ul
Total                                            ~ 12   ml

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2015-09-17 00:14:18
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傅煜雯2007

金虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by bugakbug at 2015-09-17 00:14:18
TBE buffer (89 mM Tris–borate, 2 mM EDTA, pH 8.3)
12%  polyacrylamide  gel  electrophoresis
160 V for 40 min at 4 °C.  (10 cm×10.5 cm×0.75 mm)

ddH2O                                          ...

谢谢啦!再问下,检测的时候用什么染色呢?还有,四度怎么做到呢?有特殊电泳仪吗?

发自小木虫IOS客户端
3楼2015-09-17 00:36:40
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bugakbug

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
傅煜雯2007: 金币+25, ★★★很有帮助 2015-09-17 22:55:12
SyBR Green stain DNA or RNA,
gel stain can be detected by UV transilluminator

Bio-Rad  Mini-Protein III  
http://www.artisantg.com/Scienti ... ni_Protean_III_Cell
This vertical gel electrophoresis tank can be put into an refrigerator.

Run the gel under 4 °C in order to avoid the DNA or RNA conformation change during High voltage electrophoresis.
4楼2015-09-17 01:05:33
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kobe199613

木虫之王 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
傅煜雯2007: 金币+5, 有帮助 2015-09-17 22:55:44
关于4度的问题,通常是将电泳槽放入4度冰箱中。

发自小木虫Android客户端
【招聘】医用高分子材料研发工程师(北京)
5楼2015-09-17 01:21:43
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lxzk

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
傅煜雯2007: 金币+5, 有帮助 2015-09-17 22:56:08
单链的跑尿素变性page吧,用甲酰胺loading buffer,分子克隆上有详细介绍。

[ 发自手机版 http://muchong.com/3g ]
6楼2015-09-17 05:20:53
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