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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 蛋白质的分级提取
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徘徊云中

新虫 (小有名气)

[求助] 蛋白质的分级提取 已有2人参与

急求大神指点蛋白质分级提取的具体操作步骤。
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1楼 2015-09-15 08:53:33
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徘徊云中

新虫 (小有名气)
硫酸铵的浓度是从高往低的加还是从低往高呢？
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2楼2015-09-15 08:59:04
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hc-material

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
分级沉淀是硫酸氨浓度从低往高。分级沉淀就是用不同浓度的硫酸氨先后沉淀。这是粗分离，效果不是特别好，建议你一次沉淀后，过疏水层析柱。祝顺利。
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3楼2015-09-15 09:08:05
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徘徊云中

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by hc-material at 2015-09-15 09:08:05
分级沉淀是硫酸氨浓度从低往高。分级沉淀就是用不同浓度的硫酸氨先后沉淀。这是粗分离，效果不是特别好，建议你一次沉淀后，过疏水层析柱。祝顺利。

比如说，加入低浓度的硫酸铵溶液后，搅拌离心，再往上清液中加入高浓度的吗？

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4楼2015-09-15 14:36:58
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hc-material

专家顾问 (职业作家)
引用回帖:
4楼: Originally posted by 徘徊云中 at 2015-09-15 14:36:58
比如说，加入低浓度的硫酸铵溶液后，搅拌离心，再往上清液中加入高浓度的吗？
...

对的，直接加固体好了，比如先加1克，离心后，上清在加2克。祝顺利，液体也行 ，你处理的溶液量就非常大。
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徘徊云中
5楼2015-09-15 14:49:59
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徘徊云中

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
5楼: Originally posted by hc-material at 2015-09-15 14:49:59
对的，直接加固体好了，比如先加1克，离心后，上清在加2克。祝顺利，液体也行 ，你处理的溶液量就非常大。...

嗯嗯，谢谢

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6楼2015-09-15 16:53:29
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帖航

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
硫酸铵沉淀最普遍的方法是从低浓度往高浓度分级沉淀，我也见过从高浓度往低浓度做的，先将蛋白全部沉淀，然后通过透析来分级提纯。
另外，理论上是不建议直接加硫酸铵固体的，因为会造成局部浓度过大等问题，但是如果你的实验精度要求不那么高的话，就加固体吧，方便节省时间。
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7楼2015-09-16 13:32:37
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帖航

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by 帖航 at 2015-09-16 13:32:37
硫酸铵沉淀最普遍的方法是从低浓度往高浓度分级沉淀，我也见过从高浓度往低浓度做的，先将蛋白全部沉淀，然后通过透析来分级提纯。
另外，理论上是不建议直接加硫酸铵固体的，因为会造成局部浓度过大等问题，但是如 ...

http://wenku.baidu.com/view/587624204b35eefdc8d333a9.html
这有一片关于盐析的说明，如果需要你可以看看。
你的标题是分级提取蛋白，分级提取蛋白的方法有很多，如果想了解，可以问我。
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徘徊云中
8楼2015-09-16 13:36:37
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徘徊云中

新虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
8楼: Originally posted by 帖航 at 2015-09-16 13:36:37
http://wenku.baidu.com/view/587624204b35eefdc8d333a9.html
这有一片关于盐析的说明，如果需要你可以看看。
你的标题是分级提取蛋白，分级提取蛋白的方法有很多，如果想了解，可以问我。...

好的  谢谢

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9楼2015-09-17 21:30:20
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