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王希lily新虫 (初入文坛)
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[交流]
求助关于原核表达包涵体纯化的问题？ 已有5人参与
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| 本人是新手，最近在做原核表达，表达载体为PET32，做到蛋白纯化时，优化条件后发现蛋白老是表达在沉淀中，所以需用尿素将包涵体溶解挂柱纯化，但做到包涵体洗涤液（含2M尿素）洗涤时发现蛋白变成胶冻状，根本没办法继续用8M尿素溶解，更不用说上柱纯化了，我将包涵体洗涤液洗涤的上清跑SDS-PAGE，发现有少部分目的条带。之后我又直接用8M尿素溶解，上清跑SDS-PAGE，发现几乎没有目的条带。急求哪位大神能给点意见，为什么包涵体洗涤液会将蛋白洗成胶冻状？ |
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