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love犬夜叉

木虫 (小有名气)

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[求助] 转化后小量可以摇起来，转接大量摇不起来已有1人参与

做质粒的转化，到XL1-blue菌，涂板后12小时很小，所以培养到第二天下午，满板子小菌落，牙签挑单菌落在氨苄和四环素（涂布的板子也是这两种抗生素）的培养基（1.5mlEP)管中培养，几个小时后无明显浑浊，所以又过夜，第二天取菌液做PT-PCR，呈阳性，第三天（菌液放-20保存）取200微升、400微升接种到20ML 双抗LB培养基（开始加的200微升，几个小时后没长，就又接了几管400微升的一起过夜培养），第四天早上看的时候，有的很清亮，有的略微浑浊，只有一个比较浑浊，又都做了一次RT-PCR，结果ct值都一样，拿长得最浑浊的那个转接到20ml双抗培养基又不长了，提质粒也没有条带，不知道是没有还是太微弱检测不出来。求大神指点

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