应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 基因原核表达载体的构建
121/2返回列表12下一页
查看: 1431  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

阳光---阳光

新虫 (初入文坛)

[交流] 基因原核表达载体的构建

连接转化后，目的基因在菌液中PCR可以得到，条带大小1600bp左右，正是目的基因。可是菌液提质粒后PCR只能P出2000bp和2000多bp的单一条带（不同泳道），这是为什么呢？大肠杆菌本身也没有我的目的基因。

这个是质粒PCR的图片，条带大小已经不是我的目的基因了。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
人的潜力是无限的！
1楼 2015-09-13 15:06:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

renzhiq

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阳光---阳光: 金币+4, 哦，好的，谢谢！ 2015-09-14 09:14:17
你的菌液pcr的条带太淡，很可能是假阳性……pcr条件不太适合，需重新调整……

发自小木虫Android客户端
赞一下(2人) 回复此楼
9楼2015-09-13 21:47:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沉默的独角兽

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阳光---阳光: 金币+4, 我都分别跑了，有Marker比对着 2015-09-13 16:40:22
跑一个菌液PCR和质粒PCR在一块胶的图看看先。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-09-13 15:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

zhenwuhuang

至尊木虫 (文学泰斗)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阳光---阳光: 金币+5, 恩，跑过了，酶切切出了一条更大的条带，还有一条和原来一样大的，不知道为什么 2015-09-13 17:01:07
在同一胶上，跑一个酶切前后对比
赞一下 回复此楼
3楼2015-09-13 15:27:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

naringenin

新虫 (小有名气)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阳光---阳光: 金币+2, 是啊，我点的样品也比较少，5微升 2015-09-13 17:01:39
质粒PCR条带这么淡啊，比marker还淡。
赞一下 回复此楼
4楼2015-09-13 15:31:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

naringenin

新虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阳光---阳光: 金币+5, 好的，我再试试，谢谢！ 2015-09-13 20:02:32
内切酶双切质粒，电泳看长度是不是和理论能对的上，对不上的话肯定不对。对上了的话，然后用质粒上的引物测序（如T7，sp6）确认就ok了，双向测序基本能搞定全长。不必纠结于pcr的长度。
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-13 17:34:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

沉默的独角兽

金虫 (正式写手)
★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阳光---阳光: 金币+2, 恩恩，谢谢！ 2015-09-13 20:04:16
的确，双酶切后再跑胶也可以，不要过于相信marker的指示。
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-13 18:15:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stl409
7楼2015-09-13 18:35:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

枭翔

金虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阳光---阳光: 金币+1, 是啊，不知道为什么 2015-09-14 09:13:51
你的菌落PCR的条带是不是很弱？
赞一下 回复此楼
8楼2015-09-13 21:09:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
阳光---阳光: 金币+5, 恩，我再重新试试，谢谢！ 2015-09-14 09:15:10
你是不是用目的基因的引物进行的菌液PCR？如果是的话，那么菌液PCR100%假阳性。。。后面质粒跑的结果看似乎都是载体吧，因为载体加入量少，所以很淡，而由于没有插入片段，所以引物几乎都以单体或者二聚体存在，所以引物带很亮，而模板带（加的空载质粒）比较弱。我猜的。。。
赞一下 回复此楼
10楼2015-09-13 23:22:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 阳光---阳光 的主题更新
121/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +3 地球绕着太阳转 2026-03-23 3/150 2026-03-25 19:10 by 雾散后相遇lc
[考研] 材料调剂 5+3 想要一壶桃花水 2026-03-25 6/300 2026-03-25 18:20 by xcjcqu
[考研] 考研一志愿苏州大学初始315（英一）求调剂 +3 sbdksD 2026-03-24 4/200 2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 085602 289分求调剂 +7 WWW西西弗斯 2026-03-24 7/350 2026-03-25 14:28 by 3Strings
[考研] 303求调剂 +6 元夕元 2026-03-20 7/350 2026-03-25 12:00 by edmund7
[考研] 求调剂 一志愿 本科 北科大 化学 343 +4 13831862839 2026-03-24 5/250 2026-03-25 09:47 by 无际的草原
[考研] 一志愿北化315 求调剂 +3 akrrain 2026-03-24 3/150 2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 化工专硕求调剂 +3 question挽风 2026-03-24 3/150 2026-03-24 18:48 by jhhcooi
[考研] 材料/农业专业，07/08开头均可，过线就行 +3 呵唔哦豁 2026-03-23 4/200 2026-03-23 22:30 by 汪！？！
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +3 SYA！ 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 263求调剂 +6 yqdszhdap－ 2026-03-22 9/450 2026-03-23 12:57 by yqdszhdap－
[考研] 求老师收我 +3 zzh16938784 2026-03-23 3/150 2026-03-23 12:56 by ztnimte
[考研] 276求调剂 +3 YNRYG 2026-03-21 4/200 2026-03-23 08:31 by 醉在风里
[考研] 石河子大学（211、双一流）硕博研究生长期招生公告 +3 李子目 2026-03-22 3/150 2026-03-22 21:01 by 怎么释怀
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
[考研] 329求调剂 +9 想上学吖吖 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:01 by luoyongfeng
[考研] 求调剂 +3 eation27 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:32 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭