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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 关于做蛋白标曲中的浓度计算问题。
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张小姐123

木虫 (小有名气)

[求助] 关于做蛋白标曲中的浓度计算问题。 已有2人参与

用BSA做的蛋白标曲R2有两个九。将已知浓度为0.5mg/mll的β酪蛋白溶液在酶标板上测定吸光值，代入标曲计算得到的β酪蛋白浓度为0.25mg/ml。这个大概两倍的浓度差异到底是如何造成的，请大神指教啊。
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1楼 2015-09-11 15:01:59
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
张小姐123: 金币+50, ★★★很有帮助 2015-09-11 20:13:32
首先要确定目标蛋白的浓度在标曲的线性区间里面，否则就应该先适当稀释再测通光量
如果上面做对的话，有没有可能是蛋白已经降解了呢
也有可能是那个蛋白跟BSA在氨基酸构成上相差很远，所以从BSA来的标曲就不够准确
可以考虑用其他方法 例如 lowry 或者 280
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2楼2015-09-11 19:34:49
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张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-11 19:34:49
首先要确定目标蛋白的浓度在标曲的线性区间里面，否则就应该先适当稀释再测通光量
如果上面做对的话，有没有可能是蛋白已经降解了呢
也有可能是那个蛋白跟BSA在氨基酸构成上相差很远，所以从BSA来的标曲就不够准确 ...

我已经把蛋白稀释到标曲的线性区间里面了，而且蛋白是现配现用的可以排除降解这种可能。非常感谢您给的建议，那我就试试您说的280。
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3楼2015-09-11 20:13:23
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tjuhaoran

铜虫 (小有名气)
Is there the chance that you miscalculate the dilution times?
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4楼2015-09-11 23:47:39
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张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tjuhaoran at 2015-09-11 23:47:39
Is there the chance that you miscalculate the dilution times?

做了好几个稀释，取20ul加入180的工作液，稀释倍数应该没问题。不过还是谢谢你的建议。
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5楼2015-09-12 09:25:32
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张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张小姐123 at 2015-09-11 20:13:23
我已经把蛋白稀释到标曲的线性区间里面了，而且蛋白是现配现用的可以排除降解这种可能。非常感谢您给的建议，那我就试试您说的280。...

亲，您知不知道可以用来同时测定BSA和β酪蛋白的蛋白含量的方法。紫外分光光度法应该不可以吧，他们两个里面的酪氨酸和色氨酸的含量应该差别很大，误差应该也比较大。
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6楼2015-09-12 10:09:41
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syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你可以用跑SDS-PAGE，两个蛋白同时上样一定浓度梯度对比看一下!
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7楼2015-09-15 14:27:29
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张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-09-15 14:27:29
你可以用跑SDS-PAGE，两个蛋白同时上样一定浓度梯度对比看一下!

这个能证明什么呢，应该是BSA的带更深一点。
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8楼2015-09-16 08:43:13
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syhzlsd

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 张小姐123 at 2015-09-16 08:43:13
这个能证明什么呢，应该是BSA的带更深一点。...

不同浓度的蛋白在SDS-PAGE上的挥度是不一样的
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9楼2015-09-16 16:28:10
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