应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 关于做蛋白标曲中的浓度计算问题。
91/1返回列表
查看: 2442  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

张小姐123

木虫 (小有名气)

[求助] 关于做蛋白标曲中的浓度计算问题。 已有2人参与

用BSA做的蛋白标曲R2有两个九。将已知浓度为0.5mg/mll的β酪蛋白溶液在酶标板上测定吸光值，代入标曲计算得到的β酪蛋白浓度为0.25mg/ml。这个大概两倍的浓度差异到底是如何造成的，请大神指教啊。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-09-11 15:01:59
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
张小姐123: 金币+50, ★★★很有帮助 2015-09-11 20:13:32
首先要确定目标蛋白的浓度在标曲的线性区间里面，否则就应该先适当稀释再测通光量
如果上面做对的话，有没有可能是蛋白已经降解了呢
也有可能是那个蛋白跟BSA在氨基酸构成上相差很远，所以从BSA来的标曲就不够准确
可以考虑用其他方法 例如 lowry 或者 280
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2015-09-11 19:34:49
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-09-11 19:34:49
首先要确定目标蛋白的浓度在标曲的线性区间里面，否则就应该先适当稀释再测通光量
如果上面做对的话，有没有可能是蛋白已经降解了呢
也有可能是那个蛋白跟BSA在氨基酸构成上相差很远，所以从BSA来的标曲就不够准确 ...

我已经把蛋白稀释到标曲的线性区间里面了，而且蛋白是现配现用的可以排除降解这种可能。非常感谢您给的建议，那我就试试您说的280。
赞一下 回复此楼
3楼2015-09-11 20:13:23
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

tjuhaoran

铜虫 (小有名气)
Is there the chance that you miscalculate the dilution times?
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2015-09-11 23:47:39
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by tjuhaoran at 2015-09-11 23:47:39
Is there the chance that you miscalculate the dilution times?

做了好几个稀释，取20ul加入180的工作液，稀释倍数应该没问题。不过还是谢谢你的建议。
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-12 09:25:32
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 张小姐123 at 2015-09-11 20:13:23
我已经把蛋白稀释到标曲的线性区间里面了，而且蛋白是现配现用的可以排除降解这种可能。非常感谢您给的建议，那我就试试您说的280。...

亲，您知不知道可以用来同时测定BSA和β酪蛋白的蛋白含量的方法。紫外分光光度法应该不可以吧，他们两个里面的酪氨酸和色氨酸的含量应该差别很大，误差应该也比较大。
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-12 10:09:41
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syhzlsd

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

你可以用跑SDS-PAGE，两个蛋白同时上样一定浓度梯度对比看一下!
赞一下 回复此楼
7楼2015-09-15 14:27:29
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张小姐123

木虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by syhzlsd at 2015-09-15 14:27:29
你可以用跑SDS-PAGE，两个蛋白同时上样一定浓度梯度对比看一下!

这个能证明什么呢，应该是BSA的带更深一点。
赞一下 回复此楼
8楼2015-09-16 08:43:13
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

syhzlsd

木虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 张小姐123 at 2015-09-16 08:43:13
这个能证明什么呢，应该是BSA的带更深一点。...

不同浓度的蛋白在SDS-PAGE上的挥度是不一样的
赞一下 回复此楼
9楼2015-09-16 16:28:10
已阅   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 张小姐123 的主题更新
91/1返回列表
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +4 西山十月 2026-08-09 6/300 2026-08-10 00:16 by liufeng0619
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +10 布布和一二 2026-08-08 21/1050 2026-08-09 17:21 by 天神眷顾
[基金申请] fileCode有新解读？ +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 5/250 2026-08-08 21:54 by 13586093586
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 好奇怪的filecode +3 布布和一二 2026-08-08 4/200 2026-08-08 17:46 by zhanghaozhu
[基金申请] 基金中了 +14 laoda193707 2026-08-06 14/700 2026-08-08 00:23 by 实验小白ha
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭