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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 重组之后单酶切鉴定偏小
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土豆没了

新虫 (初入文坛)

[交流] 重组之后单酶切鉴定偏小 已有5人参与

 http://\"重组之后单酶切鉴定偏小\"
如图所示：1、2为原始质粒以及其单酶切、3、4为克隆之后的质粒以及单酶切。从途中看应该是没有连上。但是在克隆板上：载体双酶切连接过夜转化后没有长出克隆子，载体加目的基因连接的板上大概出现75个克隆子这样。
载体大小：10kb ，目的基因700bp，使用BamHⅠ和HpaⅠ进行双酶切。连接摩尔比为载体：目的基因=1：3，目的基因为pcr产物，在BamHⅠ酶切位点前有两个碱基，在HpaⅠ酶切位点后有100bp片段。
连接了好几次都得到同样的结果，请问这是怎么回事啊，做了两个月了，烦，求大神指点迷津
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生活因拼搏而精彩，生命因奋斗而高贵
1楼 2015-09-11 11:00:31
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土豆没了

新虫 (初入文坛)

重组之后单酶切鉴定偏小-1
AD0A0937-6638-4CA3-B7CA-D419E55A734A.jpg
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生活因拼搏而精彩，生命因奋斗而高贵
2楼2015-09-11 11:01:46
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怜儿新

新虫 (初入文坛)
没有maker吗？
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朝梦想奔跑
3楼2015-09-14 21:33:30
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土豆没了

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 怜儿新 at 2015-09-14 21:33:30
没有maker吗？

没有，实验室刚刚用没了，所以……
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生活因拼搏而精彩，生命因奋斗而高贵
4楼2015-09-15 09:50:16
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viki_MDK

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
为什么判断没有成功？
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5楼2015-09-15 10:57:14
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怜儿新

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
4楼: Originally posted by 土豆没了 at 2015-09-15 09:50:16
没有，实验室刚刚用没了，所以……...

没maker，不好判断吧，最好对着maker跑，再分析，至少我无法判断你有没有成功
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朝梦想奔跑
6楼2015-09-15 21:41:09
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
★
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原质粒多大?切下的多大?

发自小木虫Android客户端
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7楼2015-09-16 08:57:24
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小人物12356

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
目的基因没连上吧

发自小木虫IOS客户端
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8楼2015-09-16 10:49:22
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yeyatouyhj

新虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
既然连接后质粒大小发生了改变，应该不会是没连接上的问题，会不会是酶切位点选的有问题
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9楼2015-09-16 12:30:58
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土豆没了

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by viki_MDK at 2015-09-15 10:57:14
为什么判断没有成功？

酶切下来的片段与连接上去的片段大小是一致的，连接后单酶切片段偏小了，比较怪，后来用pcr引物进行克隆也没见出现目的条带，所以很确定是不是我们的连接产物
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生活因拼搏而精彩，生命因奋斗而高贵
10楼2015-09-17 10:50:22
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