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重组之后单酶切鉴定偏小 已有5人参与
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http://![\"重组之后单酶切鉴定偏小\"](\"https://muchongimg.xmcimg.com/data/bcs/2015/0911/w131h2462014_1441939855_851.jpg#opennewwindow\") 如图所示：1、2为原始质粒以及其单酶切、3、4为克隆之后的质粒以及单酶切。从途中看应该是没有连上。但是在克隆板上：载体双酶切连接过夜转化后没有长出克隆子，载体加目的基因连接的板上大概出现75个克隆子这样。 载体大小：10kb ，目的基因700bp，使用BamHⅠ和HpaⅠ进行双酶切。连接摩尔比为载体：目的基因=1：3，目的基因为pcr产物，在BamHⅠ酶切位点前有两个碱基，在HpaⅠ酶切位点后有100bp片段。 连接了好几次都得到同样的结果，请问这是怎么回事啊，做了两个月了，烦，求大神指点迷津 |
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