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大家在做western blot实验时，样品都是怎么处理的呀？已有2人参与
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RT 最近要开始做Western blot，我的样品是动物药的细粉，样品制备的话是不是不能直接稀释上样？要是做前处理的话，需要怎么处理比较好呢？ 我查了一些，发现每个不同的样品，处理方法也不同，大家做western时都是怎么处理样品的呢？ 刚刚涉及生物这方面，新手很多东西都不太懂，大家一起来交流，我也多学习一下~  |
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kobe199613
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西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2015-09-11 22:58:23
Snuggle安: 金币+5 2015-09-12 10:52:45
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Snuggle安: 金币+5 2015-09-12 10:52:45
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我的样品使肌肉组织：取适量背最长肌样品，加入裂解液（0.15M NaCl，20mM Tris–HCl（pH 8.0），1mM EDTA，1mM PMSF，0.1μM E-46，0.08μM aprotinin，0.1μM leupetin，0.1%NP-40）进 行匀浆并置冰上充分裂解 30min，之后再用超声波破碎仪处理，于 4℃下 12000rpm/min 离心 10min，取上清用 BCA 法测定蛋白含量后分装于 0.5mL 离心管中并置于-20℃保 存；取 50μg 蛋白与适量 5×上样缓冲液（0.25mol/L Tris·HCl pH6.8，0.5mol/L 二硫叔 糖醇，10% SDS，0.5%溴酚蓝，50%甘油）混合，煮沸 5min，在冰上冷却后用于 Western blot 检测。 |
6楼2015-09-11 21:31:51
jingshuikeke
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evangelina
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3楼2015-09-11 12:07:03
380218013
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4楼2015-09-11 13:36:02