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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 干扰/敲除 » 质粒跑出这样的电泳图可以割胶回收吗？
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冰扣儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by hutingting at 2015-09-10 14:20:49
切后确定大小正确，就胶回收，遇到过质粒电泳异常的，测序证明没问题

谢谢
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优秀，是一种习惯！
11楼2015-09-10 15:10:28
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-10 23:05:36
你7584bp切下50bp来，怎么确定一定酶切完全了呢？
回收以后做连接的时候最好做个对照，怕自连。

祝好
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12楼2015-09-10 15:30:11
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yangtzelv

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-10 13:16:47
你一样的个东西整这么多孔干啥？省着点琼脂做果冻吃不好么？这样得切下来多少？后面胶回收一路也是麻烦，一遍遍过柱子不累啊？

切吧，酶切产物大小符合预期

干这个事情，上个没有切的质粒，只是让你看看是不 ...

这个说的很有道理，赞
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13楼2015-09-10 16:18:48
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jeff瓜瓜

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-10 23:06:05
我之前也是这种状况，每次切完总是切过的质粒 比没切过的跑的快，很诡异，一次次都这样。。。后来查阅了之后发现可能是提质粒过程中破坏了质粒的超螺旋构象之类。。。于是硬着头皮往下做，由于条带单一直接用TAKARA的片段回收试剂盒回收的，居然构出需要的载体了，不过我是单酶切，希望对楼主有用
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14楼2015-09-10 20:07:38
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匿名

用户注销 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖仅楼主可见
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15楼2015-09-11 00:14:15
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冰扣儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-10 13:16:47
你一样的个东西整这么多孔干啥？省着点琼脂做果冻吃不好么？这样得切下来多少？后面胶回收一路也是麻烦，一遍遍过柱子不累啊？

切吧，酶切产物大小符合预期

干这个事情，上个没有切的质粒，只是让你看看是不 ...

谢谢指点 因为回收效率低 所以想多跑几个孔富集到一个柱子上 回首之后连接不出来 图片里是我的连接体系 不知道为什么 若你能帮我分析出问题在哪里 我请你吃好多好多果冻
质粒跑出这样的电泳图可以割胶回收吗？
QQ图片 连接体系.jpg
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优秀，是一种习惯！
16楼2015-09-11 14:21:21
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冰扣儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2015-09-10 15:30:11
你7584bp切下50bp来，怎么确定一定酶切完全了呢？
回收以后做连接的时候最好做个对照，怕自连。

祝好

谢谢 作了对照
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优秀，是一种习惯！
17楼2015-09-11 14:31:18
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冰扣儿

新虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by jeff瓜瓜 at 2015-09-10 20:07:38
我之前也是这种状况，每次切完总是切过的质粒 比没切过的跑的快，很诡异，一次次都这样。。。后来查阅了之后发现可能是提质粒过程中破坏了质粒的超螺旋构象之类。。。于是硬着头皮往下做，由于条带单一直接用TAKARA ...

谢谢 我也连接了 但是就长出了两个单菌落 不知道是不是杂菌
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优秀，是一种习惯！
18楼2015-09-11 14:32:51
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鬼羽帝魂

木虫 (著名写手)
引用回帖:
17楼: Originally posted by 冰扣儿 at 2015-09-11 14:31:18
谢谢 作了对照...

如果你那两个单克隆没有预期的克隆，可以试着先单酶切一个位点-回收纯化-酶切第二个-回收纯化-连接。      回收之前一定跑胶看看是否已经完全线性化，再回收。

发自小木虫Android客户端
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19楼2015-09-11 15:06:03
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trizol11

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
质粒成功构建后，你取5微升点一下胶就可以了，还剩余很多的，不用回收吧。我觉得，
对于你这个图片，可以回收质粒，有没有杂带，只是拖尾。
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任重道远……
20楼2015-09-11 16:16:12
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