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冰扣儿

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9楼: Originally posted by hutingting at 2015-09-10 14:20:49
切后确定大小正确，就胶回收，遇到过质粒电泳异常的，测序证明没问题

谢谢

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11楼2015-09-10 15:10:28

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鬼羽帝魂

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【答案】应助回帖

★
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-10 23:05:36

你7584bp切下50bp来，怎么确定一定酶切完全了呢？
回收以后做连接的时候最好做个对照，怕自连。

祝好

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12楼2015-09-10 15:30:11

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yangtzelv

新虫 (小有名气)

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7楼: Originally posted by biostar2009 at 2015-09-10 13:16:47
你一样的个东西整这么多孔干啥？省着点琼脂做果冻吃不好么？这样得切下来多少？后面胶回收一路也是麻烦，一遍遍过柱子不累啊？

切吧，酶切产物大小符合预期

干这个事情，上个没有切的质粒，只是让你看看是不 ...

这个说的很有道理，赞

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13楼2015-09-10 16:18:48

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jeff瓜瓜

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-10 23:06:05

我之前也是这种状况，每次切完总是切过的质粒比没切过的跑的快，很诡异，一次次都这样。。。后来查阅了之后发现可能是提质粒过程中破坏了质粒的超螺旋构象之类。。。于是硬着头皮往下做，由于条带单一直接用TAKARA的片段回收试剂盒回收的，居然构出需要的载体了，不过我是单酶切，希望对楼主有用

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14楼2015-09-10 20:07:38

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匿名

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15楼2015-09-11 00:14:15

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冰扣儿

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引用回帖:

谢谢指点因为回收效率低所以想多跑几个孔富集到一个柱子上回首之后连接不出来图片里是我的连接体系不知道为什么若你能帮我分析出问题在哪里我请你吃好多好多果冻

QQ图片连接体系.jpg

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16楼2015-09-11 14:21:21

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冰扣儿

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12楼: Originally posted by 鬼羽帝魂 at 2015-09-10 15:30:11
你7584bp切下50bp来，怎么确定一定酶切完全了呢？
回收以后做连接的时候最好做个对照，怕自连。

祝好

谢谢作了对照

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17楼2015-09-11 14:31:18

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14楼: Originally posted by jeff瓜瓜 at 2015-09-10 20:07:38
我之前也是这种状况，每次切完总是切过的质粒比没切过的跑的快，很诡异，一次次都这样。。。后来查阅了之后发现可能是提质粒过程中破坏了质粒的超螺旋构象之类。。。于是硬着头皮往下做，由于条带单一直接用TAKARA ...

谢谢我也连接了但是就长出了两个单菌落不知道是不是杂菌

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18楼2015-09-11 14:32:51

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