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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 培养/筛选 » 请问挑出来的重组子做快转接种，同一个平板的菌落会不会既有我需要的重组子也有空载
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evil丶zero

金虫 (小有名气)

[求助] 请问挑出来的重组子做快转接种，同一个平板的菌落会不会既有我需要的重组子也有空载 已有2人参与

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1楼 2015-09-09 09:32:32
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hc-material

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
evil丶zero: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-09 16:03:01
不会的吧。空载在抗性赛选培养基上不长的啊。祝顺利。
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2楼2015-09-09 09:44:33
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evil丶zero

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-09-09 09:44:33
不会的吧。空载在抗性赛选培养基上不长的啊。祝顺利。

我这个是有抗性的空载，目的片段1000多bp。

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3楼2015-09-09 10:07:07
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zhuabachon

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
evil丶zero: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-09 16:03:12
筛选的抗性与空载一样？那不好筛啊。即使不一样空载的菌会在阳性菌周边长出小的菌落，成卫星菌落也是正常的。
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4楼2015-09-09 10:55:46
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evil丶zero

金虫 (小有名气)
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4楼: Originally posted by zhuabachon at 2015-09-09 10:55:46
筛选的抗性与空载一样？那不好筛啊。即使不一样空载的菌会在阳性菌周边长出小的菌落，成卫星菌落也是正常的。

可以筛出来，筛选就是概率问题。问题是我挑出来的重组子做转化，因为时间不超过12小时平板上的菌落很小，怕接不上所以我每瓶接种接了两三个菌落。后来想菌落不是单一的会不会一个平板上的菌落有两种类型呢？
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5楼2015-09-09 16:08:14
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zhuabachon

金虫 (小有名气)
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5楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-09-09 16:08:14
可以筛出来，筛选就是概率问题。问题是我挑出来的重组子做转化，因为时间不超过12小时平板上的菌落很小，怕接不上所以我每瓶接种接了两三个菌落。后来想菌落不是单一的会不会一个平板上的菌落有两种类型呢？...

一般来说都是单一的，你是摇菌液后做PCR鉴定吗，鉴定为阳性以后，还得多划几次平板纯化下才能用。
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evil丶zero
6楼2015-09-09 20:54:27
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evil丶zero

金虫 (小有名气)
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6楼: Originally posted by zhuabachon at 2015-09-09 20:54:27
一般来说都是单一的，你是摇菌液后做PCR鉴定吗，鉴定为阳性以后，还得多划几次平板纯化下才能用。...

做的是酶切验证，条带清晰。对了你说的还要划线在接一次是标准流程么？我没有做啊，直接拿去测序了…老板我会不会骂我？

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7楼2015-09-10 00:26:16
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zhuabachon

金虫 (小有名气)
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7楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-09-10 00:26:16
做的是酶切验证，条带清晰。对了你说的还要划线在接一次是标准流程么？我没有做啊，直接拿去测序了…老板我会不会骂我？
...

就怕不纯测出来杂峰啊，纯化后你以后保存及提取质粒才不会误事。看测的结果吧。结果出来通知我下哦。
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evil丶zero
8楼2015-09-10 12:38:43
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evil丶zero

金虫 (小有名气)
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8楼: Originally posted by zhuabachon at 2015-09-10 12:38:43
就怕不纯测出来杂峰啊，纯化后你以后保存及提取质粒才不会误事。看测的结果吧。结果出来通知我下哦。...

两个样品测序，一个结果很完美，接头序列没有问题；另一个测序公司说，鉴定无条带，还请重新提取质粒测序。
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9楼2015-09-21 13:41:10
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zhuabachon

金虫 (小有名气)
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9楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-09-21 13:41:10
两个样品测序，一个结果很完美，接头序列没有问题；另一个测序公司说，鉴定无条带，还请重新提取质粒测序。...

两个是重复吗，无条带应该就是空载质粒了
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10楼2015-09-22 11:16:28
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