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evil丶zero

金虫 (小有名气)

[求助] 请问挑出来的重组子做快转接种,同一个平板的菌落会不会既有我需要的重组子也有空载 已有2人参与

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hc-material

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
evil丶zero: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-09 16:03:01
不会的吧。空载在抗性赛选培养基上不长的啊。祝顺利。
2楼2015-09-09 09:44:33
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evil丶zero

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by hc-material at 2015-09-09 09:44:33
不会的吧。空载在抗性赛选培养基上不长的啊。祝顺利。

我这个是有抗性的空载,目的片段1000多bp。

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3楼2015-09-09 10:07:07
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zhuabachon

金虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
evil丶zero: 金币+2, ★★★很有帮助 2015-09-09 16:03:12
筛选的抗性与空载一样?那不好筛啊。即使不一样空载的菌会在阳性菌周边长出小的菌落,成卫星菌落也是正常的。
4楼2015-09-09 10:55:46
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evil丶zero

金虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by zhuabachon at 2015-09-09 10:55:46
筛选的抗性与空载一样?那不好筛啊。即使不一样空载的菌会在阳性菌周边长出小的菌落,成卫星菌落也是正常的。

可以筛出来,筛选就是概率问题。问题是我挑出来的重组子做转化,因为时间不超过12小时平板上的菌落很小,怕接不上所以我每瓶接种接了两三个菌落。后来想菌落不是单一的会不会一个平板上的菌落有两种类型呢?
5楼2015-09-09 16:08:14
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zhuabachon

金虫 (小有名气)


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5楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-09-09 16:08:14
可以筛出来,筛选就是概率问题。问题是我挑出来的重组子做转化,因为时间不超过12小时平板上的菌落很小,怕接不上所以我每瓶接种接了两三个菌落。后来想菌落不是单一的会不会一个平板上的菌落有两种类型呢?...

一般来说都是单一的,你是摇菌液后做PCR鉴定吗,鉴定为阳性以后,还得多划几次平板纯化下才能用。

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6楼2015-09-09 20:54:27
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evil丶zero

金虫 (小有名气)

送红花一朵
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6楼: Originally posted by zhuabachon at 2015-09-09 20:54:27
一般来说都是单一的,你是摇菌液后做PCR鉴定吗,鉴定为阳性以后,还得多划几次平板纯化下才能用。...

做的是酶切验证,条带清晰。对了你说的还要划线在接一次是标准流程么?我没有做啊,直接拿去测序了…老板我会不会骂我?

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7楼2015-09-10 00:26:16
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zhuabachon

金虫 (小有名气)


引用回帖:
7楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-09-10 00:26:16
做的是酶切验证,条带清晰。对了你说的还要划线在接一次是标准流程么?我没有做啊,直接拿去测序了…老板我会不会骂我?
...

就怕不纯测出来杂峰啊,纯化后你以后保存及提取质粒才不会误事。看测的结果吧。结果出来通知我下哦。

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8楼2015-09-10 12:38:43
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evil丶zero

金虫 (小有名气)

送红花一朵
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8楼: Originally posted by zhuabachon at 2015-09-10 12:38:43
就怕不纯测出来杂峰啊,纯化后你以后保存及提取质粒才不会误事。看测的结果吧。结果出来通知我下哦。...

两个样品测序,一个结果很完美,接头序列没有问题;另一个测序公司说,鉴定无条带,还请重新提取质粒测序。
9楼2015-09-21 13:41:10
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zhuabachon

金虫 (小有名气)


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9楼: Originally posted by evil丶zero at 2015-09-21 13:41:10
两个样品测序,一个结果很完美,接头序列没有问题;另一个测序公司说,鉴定无条带,还请重新提取质粒测序。...

两个是重复吗,无条带应该就是空载质粒了
10楼2015-09-22 11:16:28
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