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sonny

金虫 (著名写手)

[交流] 关于转染的一些问题,求讨论!

目前在用Flp-In TRex-293做可诱导表达的稳转表达系,该细胞正常培养需要Zeocin和Blasticidin两种选择抗性维持,转染进外源重组质粒后,定点插入后会导致Zeocin抗性消失,获得Hygromycin B抗性,而Blasticidin抗性一直存在。

我的问题是:在做转染过程中,是否需要加入Blasticidin抗生素??
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evangelina

无虫 (小有名气)

★ ★
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sonny: 金币+1 2015-11-29 20:45:12
转染过程不要加抗生素,转染后1天换培养液才加
4楼2015-09-08 20:46:23
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月晓寒

铁虫 (初入文坛)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
sonny: 金币+1 2015-11-29 20:45:43
楼主你好,我们实验室也需要flp in 293细胞,你可以分给我一支细胞吗?用其他菌株或者质粒来换?
5楼2015-11-05 17:46:17
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铿锵爪神

金虫 (正式写手)

★ ★
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sonny: 金币+1 2015-11-29 20:46:05
我们转染一般也不加抗性

发自小木虫Android客户端
6楼2015-11-05 22:26:19
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
sonny: 金币+1 2015-11-29 20:46:12
楼主要做什么转染瞬时转染还是要进行稳转细胞系构建,转染这个过程是不需要抗性的,等转染结束了换培养基可以加入抗性,稳转株筛选的话将目的基因整合到细胞自身的基因组上,楼主说的定点插入导致抗性消失是否可以避免。。
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
7楼2015-11-09 17:04:40
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