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playboy723

金虫 (正式写手)

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[交流] 【求助/交流】关于逆转录病毒感染的问题已有1人参与

大家有做逆转录病毒的吗？我现在遇到了一些问题想向大家请教一下：
首先是感染效率太低，我用的是PLAT-E包装细胞，病毒是小鼠moloney病毒，6cm dish转染8ug质粒，转染效率有70%左右，换液后36h出毒，之后24h第二次出毒，加4ug/ml polybrene感染小鼠成纤维细胞（分别感染6h），两次感染后48h观察荧光发现感染率不到30%，也就20左右，这么低的效率我都没有办法继续做下游的实验了，大家有做过的吗？请教一下如何提高感染的效率？可能的问题会是在哪里？出毒少还是感染条件不好，请大家指教！谢谢
另一个问题是有时候感染后的细胞会全部死亡，有好几次这样的情况，有时是感染后换液时发现细胞已经死亡，有时是换液时细胞还好好的，换液后24h细胞全部死亡。我不知道怎么会出现这样的情况，难道是病毒液太酸了？不会吧，我见过那48h后的病毒液感染细胞也没有问题的，或者是病毒太多了造成细胞死亡？好像也不是这个问题，因为毕竟感染率连30%都不到！真的很头疼，请高手帮我一下吧不胜感激！谢谢

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