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playboy723

金虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】关于逆转录病毒感染的问题 已有1人参与

大家有做逆转录病毒的吗?我现在遇到了一些问题想向大家请教一下:
    首先是感染效率太低,我用的是PLAT-E包装细胞,病毒是小鼠moloney病毒,6cm dish转染8ug质粒,转染效率有70%左右,换液后36h出毒,之后24h第二次出毒,加4ug/ml polybrene感染小鼠成纤维细胞(分别感染6h),两次感染后48h观察荧光发现感染率不到30%,也就20左右,这么低的效率我都没有办法继续做下游的实验了,大家有做过的吗?请教一下如何提高感染的效率?可能的问题会是在哪里?出毒少还是感染条件不好,请大家指教!谢谢
    另一个问题是有时候感染后的细胞会全部死亡,有好几次这样的情况,有时是感染后换液时发现细胞已经死亡,有时是换液时细胞还好好的,换液后24h细胞全部死亡。我不知道怎么会出现这样的情况,难道是病毒液太酸了?不会吧,我见过那48h后的病毒液感染细胞也没有问题的,或者是病毒太多了造成细胞死亡?好像也不是这个问题,因为毕竟感染率连30%都不到!真的很头疼,请高手帮我一下吧   不胜感激!谢谢
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spring-liu

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
遇到同样问题,不知楼主解决没有
做一颗有用的蛀虫
2楼2016-06-01 09:55:47
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