最近这是怎么了，PCR总是有突变，啥出问题了？？？？ - 分子生物 - PCR相关

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南方科技大学公共卫生及应急管理学院2025级博士研究生招生报考通知

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mlanqiang

木虫之王 (文学泰斗)

蓝博士

应助: 3409 (副教授)
金币: 55278.8
散金: 5498
红花: 62
帖子: 73916
在线: 730.8小时
虫号: 302202
注册: 2006-12-02
性别: GG
专业: 胶体与界面化学

blessing

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蓝精灵

11楼2015-09-09 10:15:04

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hanyu426980

新虫 (初入文坛)

应助: 8 (幼儿园)
金币: 59.9
帖子: 30
在线: 6.7小时
虫号: 3644786
注册: 2015-01-14

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

pcr条件不好可能导致突变，稍微降低循环数

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12楼2015-09-09 10:43:32

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ghqiu09

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

13楼2015-09-09 12:20:53

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酒家何处

新虫 (小有名气)

应助: 29 (小学生)
金币: 187.8
红花: 1
帖子: 70
在线: 19.6小时
虫号: 3823340
注册: 2015-04-20

可能dntp中各成分比例有问题

发自小木虫Android客户端

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14楼2015-09-09 13:03:36

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72度冰

木虫 (正式写手)

应助: 2 (幼儿园)
金币: 3584
散金: 260
红花: 11
帖子: 318
在线: 212.5小时
虫号: 2140452
注册: 2012-11-21
性别: GG
专业: 炎症、感染与免疫

★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖

就是高保真酶的问题，推荐NEB的Q5高保真酶，也可以选择Q5-Hotstart的热启动型的高保真酶。
个人构建过几百个质粒了，2000以内没突变过，当然也都是用的高保真酶，Q5这个效果还不错实验室用了2年多了。
不值得用定点突变，因为第一你本身不一定总会碰到需要定点突变，一个点突变试剂盒也不便宜，比高保真酶贵很多。
高保真酶最好选择进口的，国产的质量参差不齐。普遍的进口的也才几百块。

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吾非予苍生，乃为汝，魁于天下。

15楼2015-09-09 15:43:43

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