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ghqiu09

禁虫 (正式写手)

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72度冰

木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
就是高保真酶的问题,推荐NEB的Q5高保真酶,也可以选择Q5-Hotstart的热启动型的高保真酶。
个人构建过几百个质粒了,2000以内没突变过,当然也都是用的高保真酶,Q5这个效果还不错实验室用了2年多了。
不值得用定点突变,因为第一你本身不一定总会碰到需要定点突变,一个点突变试剂盒也不便宜,比高保真酶贵很多。
高保真酶最好选择进口的,国产的质量参差不齐。普遍的进口的也才几百块。
吾非予苍生,乃为汝,魁于天下。
15楼2015-09-09 15:43:43
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查看全部 23 个回答

791945301

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
设计引物,定点突变。
2楼2015-09-08 20:19:31
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evangelina

无虫 (小有名气)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-17 22:40:25
1500出一个很正常吧,刚好改了氨基酸是有点倒霉啦
你可以挑多几个菌去测序,说不定会有对的。除非突变是在PCR前几个cycle出来的。
要不就按楼上说的,做site-directed mutagenesis把它改回来。
不过假如你的酶本身就不好,这么做又有可能出现新的突变。
3楼2015-09-08 20:52:16
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jeff瓜瓜

铁虫 (小有名气)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-17 22:40:47
怎么回收片段的,如果是切胶回收的话紫外照射时间过长容易引起点突变
4楼2015-09-08 21:04:47
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