最近这是怎么了，PCR总是有突变，啥出问题了？？？？ - 分子生物 - PCR相关

yangxp2006

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换酶吧，一直在用kod，的目前构建4KB以下片段，未出现过错配…

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17楼2015-09-09 23:20:48

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791945301

新虫 (初入文坛)

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设计引物，定点突变。

2楼2015-09-08 20:19:31

evangelina

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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-17 22:40:25

1500出一个很正常吧，刚好改了氨基酸是有点倒霉啦
你可以挑多几个菌去测序，说不定会有对的。除非突变是在PCR前几个cycle出来的。
要不就按楼上说的，做site-directed mutagenesis把它改回来。
不过假如你的酶本身就不好，这么做又有可能出现新的突变。

3楼2015-09-08 20:52:16

jeff瓜瓜

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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-17 22:40:47

怎么回收片段的，如果是切胶回收的话紫外照射时间过长容易引起点突变

4楼2015-09-08 21:04:47