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pMD19T测序无信号 已有7人参与
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大家有没有用过TAKARA的pMD19T载体？ 我构建了4种质粒，自己PCR都没问题，但是用pMD19T的通用引物测序时，3家测序公司都说没有信号，华大说通用引物结合不上去，大家遇到过这个问题吗？ 是pMD19T载体的质量问题吗？ |
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13楼2015-09-10 11:05:09
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
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自己PCR用到载体的通用引物了吗，一般用M13F-47和M13R-48，序列网上有，退火60℃即可，如果能P出亮的目的条带就对了。也可以对筛选出的阳性克隆进行进一步的检测，就是用自己的引物和通用引物做4个组合再进行PCR，其中只有两个组合能P出亮带，因为插入序列的方向不确定。比如，用特异引物和通用引物都是下游引物以及都是上游引物时才能P出条带，出现这种情况说明序列是反向插入的。自己检测试试吧，没问题的。 发自小木虫Android客户端 |
3楼2015-09-07 14:14:14
4楼2015-09-07 14:29:17
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