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小小技术官

木虫 (正式写手)

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[求助] Filipin Staining 非律平细胞染色 UV 激发看不到

各位虫友，大家好。实验遇到问题，求助大家，如果谁做过这个非律平细胞染色，麻烦指导一下，不胜感激！
最近在做一个胆固醇相关的课题，查阅文献得知 Filipin（一种抗真菌抗菌素）菲律宾菌素可以特异性结合游离的胆固醇，
然后再紫外激发下呈现特异荧光。

我操作的具体步骤：

1. 爬片
2.PBS ×3, 5min
3.4% 多聚甲醛固定 15min
4.PBS ×3, 5min
5.染色 2h (Filipin Complex: Sigma (F-9765) Stock: 50 mg/ml in DMSO final concentration 0.05 mg/ml in PBS Protect filipin solutions from light )
备注：12孔板，用了500ul工作液（不知道是否太少了点，一般免疫荧光孵抗体的话是够用了）
6.PBS ×3, 5min
7.普通免疫荧光显微镜紫外激发有些非特异点确定不是细胞内的

ps. 网上的步骤中，指出多聚甲醛固定后需要用甘氨酸（CHIP实验是需要这一步来终止多聚甲醛的）或者氯化铵终止多聚甲醛，这一步真的需要吗？

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