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小小技术官木虫 (正式写手)
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[求助]
Filipin Staining 非律平细胞染色 UV 激发 看不到
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各位虫友，大家好。实验遇到问题，求助大家，如果谁做过这个非律平细胞染色，麻烦指导一下，不胜感激！ 最近在做一个胆固醇相关的课题，查阅文献得知 Filipin（一种抗真菌抗菌素） 菲律宾菌素可以特异性 结合游离的胆固醇， 然后再紫外激发下呈现特异荧光。 我操作的具体步骤： 1. 爬片 2.PBS ×3, 5min 3.4% 多聚甲醛固定 15min 4.PBS ×3, 5min 5.染色 2h (Filipin Complex: Sigma (F-9765) Stock: 50 mg/ml in DMSO final concentration 0.05 mg/ml in PBS Protect filipin solutions from light ) 备注：12孔板，用了500ul工作液（不知道是否太少了点，一般免疫荧光孵抗体的话是够用了） 6.PBS ×3, 5min 7.普通免疫荧光显微镜 紫外激发 有些非特异点 确定不是细胞内的 ps. 网上的步骤中，指出多聚甲醛固定后 需要用甘氨酸（CHIP实验是需要这一步来终止多聚甲醛的）或者氯化铵终止 多聚甲醛，这一步真的需要吗？ |
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