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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » ［分子克隆］导师让我克隆一个20kb的片段，请问用什么质粒比较合适？
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Echo熊熊

新虫 (初入文坛)

[求助] ［分子克隆］导师让我克隆一个20kb的片段，请问用什么质粒比较合适？ 已有2人参与

现在做实验需要克隆一个20kb的片段，仅用来在大肠杆菌中复制，不需要表达，实验室没有人做过相关的实验，请问各位师兄师姐师弟师妹有没有做过类似的工作，我该选择什么样的质粒连接这么长的片段，并且用什么方法转入到大肠杆菌中去呢？
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1楼 2015-09-06 10:36:38
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
Gibson Assembly

这么长的片段不好扩增，可以考虑分几段扩，然后拼接起来。
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行至水穷处，坐看云起时
4楼2015-09-08 13:51:26
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Echo熊熊

新虫 (初入文坛)
自己顶顶顶顶顶！！！
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2楼2015-09-08 09:34:26
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380218013

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看你这个目的基因是怎么获得的，两端是否添加了酶切位点？如果有的话，很简单任何含有你这两个酶切位点的载体都可以。最简单的T载体，很容易
赞一下 回复此楼
好好生活，努力赚钱
3楼2015-09-08 13:01:07
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