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Echo熊熊

新虫 (初入文坛)

[求助] [分子克隆]导师让我克隆一个20kb的片段,请问用什么质粒比较合适? 已有2人参与

现在做实验需要克隆一个20kb的片段,仅用来在大肠杆菌中复制,不需要表达,实验室没有人做过相关的实验,请问各位师兄师姐师弟师妹有没有做过类似的工作,我该选择什么样的质粒连接这么长的片段,并且用什么方法转入到大肠杆菌中去呢?
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Echo熊熊

新虫 (初入文坛)

自己顶顶顶顶顶!!!
2楼2015-09-08 09:34:26
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380218013

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
看你这个目的基因是怎么获得的,两端是否添加了酶切位点?如果有的话,很简单任何含有你这两个酶切位点的载体都可以。最简单的T载体,很容易
好好生活,努力赚钱
3楼2015-09-08 13:01:07
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pennchem

专家顾问 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
Gibson Assembly

这么长的片段不好扩增,可以考虑分几段扩,然后拼接起来。
行至水穷处,坐看云起时
4楼2015-09-08 13:51:26
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