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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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jiawater85

木虫 (正式写手)

[交流] 求高手 RNA提取

我提取RNA后,用分光光度计测量比值,A260/A280小于1.5,做PCR后管家基因还可以,但其他基因组间差别太大,重复性太差,请教那一步出问题了?

[ Last edited by 350784478 on 2009-7-12 at 09:09 ]
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wxl0558-0

很想知道 三磷酸腺苷楼上和 raindrop8316楼上的联系方式
6楼2008-08-27 11:03:32
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★ ★
xyklmu(金币+3,VIP+0):感谢答复
小于1.5其实还是没什么所谓的~~~一般都能做出来
要说原因的话,肯定是其他的有机物质(如蛋白)的污染
如果真的很担心的话,我记得QIAGEN有出一种新的产品,辅助trizol法的
就是会在trizol层与上清层之间形成一个坚硬的防护层,这样吸取的时候就不会吸到trizol
其他基因组间差别太大?
是不是在逆转录之前没有将RNA稀释到同一个浓度?
我感觉提出来的RNA质量倒不是一个什么大问题,有时候我也会提得很糟糕
降解到比值为10或者污染到只有1.3左右,都能做出来~~没什么大问题
2楼2008-08-26 09:20:22
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raindrop8316

金虫 (正式写手)

引用回帖:
Originally posted by 我爱吃水果 at 2008-8-26 10:23:
楼上的很强哦

做RT-PCR对RNA的要求确实很低
书到用时方恨少 钱到月底不够花
4楼2008-08-26 16:22:33
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赵敏9565

铁虫 (小有名气)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):积极交流奖
jiawater85  
但其他基因组间差别太大,重复性太差,请教那一步出问题了?


“其他基因组间”是什么意思?
如果你是在半定量PCR,重复性差的话,你应该考虑是否要减少PCR循环次数。

如果你对RNA质量要求很高的,你可以对提取RNA进行纯化,用不含Rnase的DNA酶消化后,再沉淀RNA,(具体方法很容易找,如果找不到,可以问我要),如果经济情况哈,可以用QIAgen的柱子纯化,效果会更好。
5楼2008-08-26 21:01:45
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