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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 关于siRNA与shRNA的选择问题
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biyygyxkjsun

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于siRNA与shRNA的选择问题 已有2人参与

我打算开展细胞干扰试验，因为我做用的细胞为鸭的原代成肌细胞，转染方式为脂质体转染。所以不知道该选择哪一种干扰方式合适？目前已了解到，shRNA相对较难转染入至原代细胞中，但也不知道siRNA是否相对较为容易转入细胞中。病毒干扰载体是不考虑的，太贵了。恳请各位大侠指导下小弟。
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1楼 2015-09-03 16:41:02
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你是路人甲

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

原代细胞一般是从活体组织中获取的细胞，细胞体系比较复杂，不稳定，原代培养具有两个特点接触抑制和贴壁生长，原代细胞的转染要比一般传代的细胞难很多，BIODAI可以转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA。
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5楼2019-10-16 15:03:53
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
siRNA 是合成的，从公司买回来，可以直接用于短暂性的转染，用完就没有了。优点是快速便利。
shRNA 是基于质粒的。需要自己克隆，也有公司卖不过较自己克隆要贵得多。
因为是质粒，所以可以无限制的扩增，不会有用完的一天。
质粒的转染效率跟siRNA类似，不过shRNA被表达出来需要时间，所以效果可能没有siRNA直接快速。
但是shRNA质粒一般含有抗生素选择基因，这就允许你筛选稳定细胞系，不过这个很花时间（1-3个月）
不过一旦稳定细胞系筛选成功，你就再不用做转染实验了，一劳永逸。
所以两者各有所长，要看你的实验性质。
如果只是补个数据，果断用siRNA。如果建立起稳定细胞体系以后还有很多实验，建议用shRNA。
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2楼2015-09-03 19:41:34
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ysk1989

新虫 (小有名气)
原代细胞不容易转，而脂质体转染效率不高，所以我很担心您实验的成功率。我建议您换一种转染试剂。我们实验室现在用的是英格恩生物的转染试剂R4000，专门针对RNA转染，原代细胞、悬浮细胞和敏感细胞都可以转，而且他家的试剂是纳米材料的，效果优于脂质体，可以试一下。
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4楼2016-07-28 11:21:03
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