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穆远life

木虫 (正式写手)

[求助] 琼脂糖凝胶里面为什么不显示大片段 已有3人参与

请教各位:
              为什么 我扩增的片段在琼脂糖凝胶里面看不出大于两千的片段,但在聚丙烯酰胺凝胶里面可以分离出两千以上的片段,并且大于两千的片段还很多。所有的引物是反转录转座子引物。


                   琼脂糖凝胶里面为什么不显示大片段
                   琼脂糖凝胶里面为什么不显示大片段-1
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18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
穆远life: 金币+1 2015-09-01 10:41:38
穆远life: 金币+1 2015-09-01 10:58:02
是你的琼脂糖浓度没有把握好吧,2000bp的胶浓度在1.5-1.7%之间,即能分离出来。资料最后有介绍 琼脂糖浓度和分离DNA大小表格,,,http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html
todayisdifficult,tomorrowismoredifficult,butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-09-01 10:06:39
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普通回帖

穆远life

木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-09-01 10:06:39
是你的琼脂糖浓度没有把握好吧,2000bp的胶浓度在1.5-1.7%之间,即能分离出来。资料最后有介绍 琼脂糖浓度和分离DNA大小表格,,,http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html...

浓度刚好是1.6%。
3楼2015-09-01 10:42:12
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)


分辨率,灵敏度!聚丙烯酰胺灵敏度高!

发自小木虫Android客户端
4楼2015-09-01 10:49:06
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穆远life

木虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by BBMC-2012 at 2015-09-01 10:49:06
分辨率,灵敏度!聚丙烯酰胺灵敏度高!

问题的中心在琼脂糖凝胶里面就是分不开,也应该看的出有大于两千以上的片段。实际情况是琼脂糖里面看不到大于两千的片段,但是聚丙烯酰胺里面可以看出大于两千的片段很多。
5楼2015-09-01 10:56:03
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)


引用回帖:
5楼: Originally posted by 穆远life at 2015-09-01 10:56:03
问题的中心在琼脂糖凝胶里面就是分不开,也应该看的出有大于两千以上的片段。实际情况是琼脂糖里面看不到大于两千的片段,但是聚丙烯酰胺里面可以看出大于两千的片段很多。...

正常,量少,琼脂很难看见!

发自小木虫Android客户端
6楼2015-09-01 10:57:25
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no1xiaowu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2015-09-04 23:00:45
这两个的区别,从别的地方来的
1.分辨率:聚丙烯酰胺电泳相对琼脂糖凝胶电泳适合分离小片段DNA,分辨率非常强,长度上相差1bp 或质量上相差0.1%的DNA都可以彼此分离。
2.烦琐性:.聚丙烯酰胺电泳可以很快地进行,并能容纳较大的DNA上样量,但与琼脂糖凝胶电泳相比在制备和操作上还是更烦琐些。
3.进行方向:聚丙烯酰胺电泳是在恒定电场垂直方位上进行的;琼脂糖凝胶电泳是水平方向进行的。
4.分离范围:琼脂糖凝胶电泳较聚丙烯酰胺电泳的分辨率略低,但琼脂糖凝胶电泳的分离范围更广。
5.装载量:聚丙烯酰胺电泳的装载量远大于琼脂糖凝胶电泳,而其分辨率不受到显著影响。Big Smile
7楼2015-09-04 10:23:39
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no1xiaowu

新虫 (初入文坛)

楼主,第二张图是什么?
8楼2015-09-04 10:27:14
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穆远life

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by no1xiaowu at 2015-09-04 10:23:39
这两个的区别,从别的地方来的
1.分辨率:聚丙烯酰胺电泳相对琼脂糖凝胶电泳适合分离小片段DNA,分辨率非常强,长度上相差1bp 或质量上相差0.1%的DNA都可以彼此分离。
2.烦琐性:.聚丙烯酰胺电泳可以很快地进行, ...

我问的是为什么同样的引物在琼脂糖凝胶中看不大大片段,出了大片段量少还有没有可能是别的原因?
9楼2015-09-05 13:24:17
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穆远life

木虫 (正式写手)

引用回帖:
8楼: Originally posted by no1xiaowu at 2015-09-04 10:27:14
楼主,第二张图是什么?

反转录转座子标记扩增的片段。
10楼2015-09-05 13:24:43
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