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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 琼脂糖凝胶里面为什么不显示大片段
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穆远life

木虫 (正式写手)

[求助] 琼脂糖凝胶里面为什么不显示大片段 已有3人参与

请教各位：
              为什么 我扩增的片段在琼脂糖凝胶里面看不出大于两千的片段，但在聚丙烯酰胺凝胶里面可以分离出两千以上的片段，并且大于两千的片段还很多。所有的引物是反转录转座子引物。


                   琼脂糖凝胶里面为什么不显示大片段
                   琼脂糖凝胶里面为什么不显示大片段-1
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1楼 2015-09-01 09:17:10
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

18761615793

木虫 (正式写手)

小虫

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
穆远life: 金币+1 2015-09-01 10:41:38
穆远life: 金币+1 2015-09-01 10:58:02
是你的琼脂糖浓度没有把握好吧，2000bp的胶浓度在1.5-1.7%之间，即能分离出来。资料最后有介绍 琼脂糖浓度和分离DNA大小表格，，，http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html
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todayisdifficult，tomorrowismoredifficult，butthedayaftertomorrowisbeautiful
2楼2015-09-01 10:06:39
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普通回帖

穆远life

木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 18761615793 at 2015-09-01 10:06:39
是你的琼脂糖浓度没有把握好吧，2000bp的胶浓度在1.5-1.7%之间，即能分离出来。资料最后有介绍 琼脂糖浓度和分离DNA大小表格，，，http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html...

浓度刚好是1.6%。
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3楼2015-09-01 10:42:12
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)
分辨率，灵敏度！聚丙烯酰胺灵敏度高！

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4楼2015-09-01 10:49:06
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穆远life

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by BBMC-2012 at 2015-09-01 10:49:06
分辨率，灵敏度！聚丙烯酰胺灵敏度高！

问题的中心在琼脂糖凝胶里面就是分不开，也应该看的出有大于两千以上的片段。实际情况是琼脂糖里面看不到大于两千的片段，但是聚丙烯酰胺里面可以看出大于两千的片段很多。
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5楼2015-09-01 10:56:03
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BBMC-2012

木虫 (知名作家)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 穆远life at 2015-09-01 10:56:03
问题的中心在琼脂糖凝胶里面就是分不开，也应该看的出有大于两千以上的片段。实际情况是琼脂糖里面看不到大于两千的片段，但是聚丙烯酰胺里面可以看出大于两千的片段很多。...

正常，量少，琼脂很难看见！

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6楼2015-09-01 10:57:25
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no1xiaowu

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2015-09-04 23:00:45
这两个的区别，从别的地方来的
1.分辨率：聚丙烯酰胺电泳相对琼脂糖凝胶电泳适合分离小片段DNA，分辨率非常强，长度上相差1bp 或质量上相差0.1%的DNA都可以彼此分离。
2.烦琐性：.聚丙烯酰胺电泳可以很快地进行，并能容纳较大的DNA上样量，但与琼脂糖凝胶电泳相比在制备和操作上还是更烦琐些。
3.进行方向：聚丙烯酰胺电泳是在恒定电场垂直方位上进行的；琼脂糖凝胶电泳是水平方向进行的。
4.分离范围：琼脂糖凝胶电泳较聚丙烯酰胺电泳的分辨率略低，但琼脂糖凝胶电泳的分离范围更广。
5.装载量：聚丙烯酰胺电泳的装载量远大于琼脂糖凝胶电泳，而其分辨率不受到显著影响。Big Smile
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7楼2015-09-04 10:23:39
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no1xiaowu

新虫 (初入文坛)
楼主，第二张图是什么？
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8楼2015-09-04 10:27:14
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穆远life

木虫 (正式写手)
引用回帖:
7楼: Originally posted by no1xiaowu at 2015-09-04 10:23:39
这两个的区别，从别的地方来的
1.分辨率：聚丙烯酰胺电泳相对琼脂糖凝胶电泳适合分离小片段DNA，分辨率非常强，长度上相差1bp 或质量上相差0.1%的DNA都可以彼此分离。
2.烦琐性：.聚丙烯酰胺电泳可以很快地进行， ...

我问的是为什么同样的引物在琼脂糖凝胶中看不大大片段，出了大片段量少还有没有可能是别的原因？
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9楼2015-09-05 13:24:17
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穆远life

木虫 (正式写手)
引用回帖:
8楼: Originally posted by no1xiaowu at 2015-09-04 10:27:14
楼主，第二张图是什么？

反转录转座子标记扩增的片段。
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10楼2015-09-05 13:24:43
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