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为什么用提藻的DNA做18sRNA的PCR就是做不出来 已有1人参与
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我提了三角褐指藻的总DNA，跑电泳，跑出来了，而且比marker还亮，但是我把总DNA稀释2、4、6、8倍做18sPCR，跑不出条带，后来查了一下资料，说做PCR的模板有1ng的DNA就够了。所以后来我又跑胶，估计了一下DNA的浓度，浓度应该是大于100ng/5ul的，就把提出来的DNA稀释了50倍、100倍、150倍、200倍再做18sRNA的PCR，但是后来跑胶还是没有跑出来，我想问问各位大神，这到底是怎么了？哪里出问题了？我接下来该怎么办？ |
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18761615793
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4楼2015-09-06 09:50:51
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【答案】应助回帖
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感谢参与，应助指数 +1
启从QICONG: 金币+4, ★★★很有帮助, 太赞啦，谢谢啦 2015-09-02 11:53:47
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不一定是1ng，看你是什么模板，不同来源的模板和上样量的要求，看资料里边有（http://www.detaibio.com/topics/pcr-faq-specific-amplify.html） 模板浓度，引物浓度，酶浓度这些东西按照酶的说明书操作都能扩增出来，跑不出来，稍微优化一下体系也差不多能有个结果，你不要只纠结于模板浓度，毕竟是分子实验多方面考虑啊，引物特异性验证，扩增酶要高特异性热启动聚合酶扩增，摸索温度条件等，祝成功 |
2楼2015-09-01 10:16:05
3楼2015-09-03 13:12:45
