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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 蛋白异源表达中如何在His-Tag前插入几个氨基酸？
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若水空杯

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白异源表达中如何在His-Tag前插入几个氨基酸？ 已有5人参与

各位虫友们，最近在表达一个多肽，想在His-Tag前插入几个氨基酸，请问，如何设计突变实验？
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每一个不曾起舞的日子，都是对生命的辜负！
1楼 2015-08-31 13:18:27
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-20 22:21:51
可以直接用PCR做吧，例如说你要加两个氨基酸 Met和Ala
设计点突变的引物把 ATGGCN 这六个碱基插到目标位点，把它放在引物中间，左右各放12-15个与模板互补的碱基
Reverse primer 就跟Forward 完全互补逆转就 okay 了
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2楼2015-08-31 14:19:55
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若水空杯

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-08-31 14:19:55
可以直接用PCR做吧，例如说你要加两个氨基酸 Met和Ala
设计点突变的引物把 ATGGCN 这六个碱基插到目标位点，把它放在引物中间，左右各放12-15个与模板互补的碱基
Reverse primer 就跟Forward 完全互补逆转就 okay ...

一个两个还好说，但是我要插入六个赖氨酸，这本身就是18个碱基，是不是很难做PCR啊？
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每一个不曾起舞的日子，都是对生命的辜负！
3楼2015-09-01 08:49:05
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yyqi2015

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2015-09-09 12:13:04
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MHSW

禁言 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2015-09-19 13:30:00
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naringenin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

pcr的引物，5'外端设计多少个都没问题，18个当然没问题。
在互补的碱基和内切酶碱基中间随便加吧。
退火温度看的是匹配的序列
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6楼2015-09-20 13:59:52
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xingwancai

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用基因重组的试剂盒

发自小木虫Android客户端
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7楼2015-09-20 18:43:28
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