应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 蛋白异源表达中如何在His-Tag前插入几个氨基酸？
71/1返回列表
查看: 1549  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

若水空杯

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白异源表达中如何在His-Tag前插入几个氨基酸？ 已有5人参与

各位虫友们，最近在表达一个多肽，想在His-Tag前插入几个氨基酸，请问，如何设计突变实验？
回复此楼

» 猜你喜欢
每一个不曾起舞的日子，都是对生命的辜负！
1楼 2015-08-31 13:18:27
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-20 22:21:51
可以直接用PCR做吧，例如说你要加两个氨基酸 Met和Ala
设计点突变的引物把 ATGGCN 这六个碱基插到目标位点，把它放在引物中间，左右各放12-15个与模板互补的碱基
Reverse primer 就跟Forward 完全互补逆转就 okay 了
赞一下 回复此楼
2楼2015-08-31 14:19:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

若水空杯

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-08-31 14:19:55
可以直接用PCR做吧，例如说你要加两个氨基酸 Met和Ala
设计点突变的引物把 ATGGCN 这六个碱基插到目标位点，把它放在引物中间，左右各放12-15个与模板互补的碱基
Reverse primer 就跟Forward 完全互补逆转就 okay ...

一个两个还好说，但是我要插入六个赖氨酸，这本身就是18个碱基，是不是很难做PCR啊？
赞一下 回复此楼
每一个不曾起舞的日子，都是对生命的辜负！
3楼2015-09-01 08:49:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yyqi2015

禁虫 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2015-09-09 12:13:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

MHSW

禁言 (正式写手)
本帖内容被屏蔽
5楼2015-09-19 13:30:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

naringenin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

pcr的引物，5'外端设计多少个都没问题，18个当然没问题。
在互补的碱基和内切酶碱基中间随便加吧。
退火温度看的是匹配的序列
赞一下 回复此楼
6楼2015-09-20 13:59:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xingwancai

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用基因重组的试剂盒

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2015-09-20 18:43:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 若水空杯 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 娱乐 +6 Tide man 2026-08-03 6/300 2026-08-07 22:40 by 铁帽子农民
[基金申请] 关于代码变化问题，想知道的进来 +9 且听虎啸 2026-08-07 12/600 2026-08-07 21:53 by 理想三旬2025
[基金申请] 基金中了 +13 laoda193707 2026-08-06 13/650 2026-08-07 20:33 by tchen18
[基金申请] 关于filecode +3 布布和一二 2026-08-07 6/300 2026-08-07 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] 听说今天filecode变了 +24 布布和一二 2026-08-06 47/2350 2026-08-07 16:02 by zhiyanjiang
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +3 布布和一二 2026-08-07 3/150 2026-08-07 15:09 by gltch
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
[论文投稿] 十年后又回来了，论文投稿求助 +4 哈哈114477 2026-08-01 4/200 2026-08-07 14:39 by jgy194592
[基金申请] 大家散了吧，后缀研究没有意义，别浪费时间了，过好目前的每一天，不要焦虑 +5 Tide man 2026-08-06 7/350 2026-08-07 13:11 by 医学老男孩
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +4 yang182083 2026-08-06 6/300 2026-08-07 12:43 by 虫友是什么虫
[基金申请] filecode +14 等待解的谜 2026-08-06 19/950 2026-08-07 12:20 by wlwhappy
[基金申请] filecode +8 布布和一二 2026-08-06 11/550 2026-08-06 20:41 by tangpu318
[基金申请] 求各位大神看下 100+6 hpkpkpkp 2026-08-05 33/1650 2026-08-06 14:49 by zhiyanjiang
[基金申请] 8月时间戳变的，举个手。玩一下，释放压力 +9 archvillain 2026-08-04 11/550 2026-08-05 20:06 by wlwhappy
[基金申请] 好消息？这个有何含义？？？ +8 Tide man 2026-08-05 10/500 2026-08-05 16:14 by xmuxiaoyu
[考博] 【2027博士申请】纳米药物递送方向 20+3 13586093586 2026-08-03 4/200 2026-08-05 09:59 by lfy8008
[基金申请] 有没有H口的？有收到消息的吗？ +3 超级海虾 2026-08-04 3/150 2026-08-04 17:26 by 学教育滴
[基金申请] 纯娱乐，不喜欢勿喷 +7 Tide man 2026-08-04 10/500 2026-08-04 15:10 by loufangrui
[基金申请] 面上提前没消息，有中的吗 +14 archvillain 2026-08-02 18/900 2026-08-04 14:42 by archvillain
[基金申请] 什么时候能放榜呀？ +3 Jacob678 2026-08-03 3/150 2026-08-03 16:14 by gltch
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭