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若水空杯

铜虫 (初入文坛)

[求助] 蛋白异源表达中如何在His-Tag前插入几个氨基酸? 已有5人参与

各位虫友们,最近在表达一个多肽,想在His-Tag前插入几个氨基酸,请问,如何设计突变实验?
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每一个不曾起舞的日子,都是对生命的辜负!
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naringenin

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

pcr的引物,5'外端设计多少个都没问题,18个当然没问题。
在互补的碱基和内切酶碱基中间随便加吧。
退火温度看的是匹配的序列
6楼2015-09-20 13:59:52
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evangelina

无虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2015-09-20 22:21:51
可以直接用PCR做吧,例如说你要加两个氨基酸 Met和Ala
设计点突变的引物把 ATGGCN 这六个碱基插到目标位点,把它放在引物中间,左右各放12-15个与模板互补的碱基
Reverse primer 就跟Forward 完全互补逆转就 okay 了
2楼2015-08-31 14:19:55
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若水空杯

铜虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by evangelina at 2015-08-31 14:19:55
可以直接用PCR做吧,例如说你要加两个氨基酸 Met和Ala
设计点突变的引物把 ATGGCN 这六个碱基插到目标位点,把它放在引物中间,左右各放12-15个与模板互补的碱基
Reverse primer 就跟Forward 完全互补逆转就 okay ...

一个两个还好说,但是我要插入六个赖氨酸,这本身就是18个碱基,是不是很难做PCR啊?
每一个不曾起舞的日子,都是对生命的辜负!
3楼2015-09-01 08:49:05
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yyqi2015

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

4楼2015-09-09 12:13:04
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