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尐然不同

新虫 (小有名气)

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[求助] 细柱子保留时间太短问题，如何选择好的梯度洗脱？（有色谱图）已有4人参与

用的是Sepax BR-C18 2.1*150mm 3um的细柱子，分离物质的logP都很小(如下图)，导致保留时间极短，而且没有办法分开，样品用甲醇溶解的，流动相用的也是甲醇和水，第一张色谱图的梯度是甲醇的比例0-10min，50%-60%；10-20min,60%-100%; 20-35min, 100%.
问题如下，求各位大神帮助！
1.细柱子虽然柱压确实高，不过这里用50%甲醇为流动相时柱压接近25MPa, 就算柱子受得了仪器也受不了了
2.前面的物质logP较小，难以分开，而且进单样的时候（有机相比例较低60%-80%），柱效也很低，大概4000左右，不知道如何能够提高前面物质的柱效，并实现良好分离
3.后面的物质需要在纯有机相的条件下冲洗出来，如何能够较合理的设置梯度洗脱，在保证物质完全分离的情况下，缩短中间时间
4.后期还是打算为了柱压和峰形考虑，换成乙腈为流动相，那样洗脱能力更强，样品溶解是不是也得更改溶剂？有机相比例还需要降低？
求助各位大神，谢谢！

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8 methanol tidu5-10 0.3 01.png

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1楼 2015-08-29 19:53:35

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尐然不同

新虫 (小有名气)

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引用回帖:

6楼: Originally posted by xmin828 at 2015-08-31 14:00:15
LZ，柱子细不细（一般我们指内径）其实不会非常影响保留时间，你这个柱子内径窄，但是填料粒径小，所以其实resolution很高，理论上短柱的分离效果确实比长柱要高，但你这根柱子对于你这个粒径来说是可以的，我很少看 ...

这个是150mm的柱子啊，现在问题主要是不知道如何利用梯度分开