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有关总RNA提取问题请教大家哦！！
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我是第一次做提取总RNA实验做RT-PCR，但是感觉结果总是不理想。 首先，我的吸头和离心管都是进口的，而且我还经过DEPC处理过后高温高压没菌，其次是提取后乙醇沉淀后可以清楚看到离心管底部有淡淡白白的东西，为了不被基因组污染我还尽量只吸到三层中的上层透明液体。 其次我怕是反转录试剂盒有问题，又换了一个新的，可是反转录第一条CDNA后，结果跑胶发现带很不明亮，比少量标准DNA还淡很多。 然后我用自己的引物去PCR拉目的基因，PCR形成的总是引物多聚体带。 现在我正在找个内参引物，但是cDNA带不亮问题怎么去解决啊？我怀疑是不是EB不能很好地插入单条CDNA链而使反转录第一条CDNA跑胶不亮。 总之，提取总RNA后反转录第一条CDNA后为什么跑胶带不亮？？、？？ 谢谢哦！！！ |
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