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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 质粒转入真菌，必须将其线性化吗？
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lybio

金虫 (正式写手)

[交流] 质粒转入真菌，必须将其线性化吗？

大家好！构建好的质粒要与曲霉的基因组继续同源重组，采用PEG－原生质体法必须将它线性化才能转入吗？还是只要质粒就行？有人用过醋酸锂转染曲霉吗，它的优点是不是不需要制备原生质体，更方便？
我是采用PEG－原生质体法，用构建好的质粒PCR扩增出需要同源重组的基因片断，将它转入原生质体。反复做了5批，前3批都是用于摸索制备原生质体的条件，后两批均未转化出菌，很是着急。希望能够得到大家的帮忙，转化过程中还要注意什么，谢谢！
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1楼 2008-08-23 16:06:35
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克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

呵呵

★
lybio(金币+1,VIP+0):谢谢你的提意！
不一定线性化,你的问题是没长出菌,可能和原生质体再生率有关.
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4楼2008-08-24 18:53:10
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pph0259

木虫 (正式写手)
★ ★
lybio(金币+2,VIP+0):谢谢，学习了！
不一定，线性DNA重组效率高于环形DNA，但是转化效率低了很多！
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2楼2008-08-23 21:29:48
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xiaoyadxy

金虫 (小有名气)
★ ★
lybio(金币+2,VIP+0):谢谢提供的资料！
我看了日本人做的把锰过氧化物酶基因转到平菇中的文章是用质粒直接转的，用的也是原生质体PEG介导，你可以参考一下：
Molecular breeding of white rot fungus Pleurotus ostreatus by homologous expression of its versatile peroxidase MnP2
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3楼2008-08-23 22:44:28
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lybio

金虫 (正式写手)
★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):积极交流奖
我觉得原生质体再生率是有影响，但不会影响很大，使它菌都没长吧。首先通过镜检，制备的原生质体数量可达到10的6次方/ml，而且镜检基本上没有菌丝体。如果我将原生质体稀释10的3次方直接涂步在完全培养基中（转化的是营养缺陷型），能长的话，应该可以说明制得的原生质体再生率算还行吧。或者就直接做个计算再生率的实验。呃，试下再说吧，等结果出来再请教讨论
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5楼2008-08-24 22:33:44
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