24小时热门版块排行榜    

查看: 697  |  回复: 4
当前主题已经存档。
【有奖交流】积极回复本帖子,参与交流,就有机会分得作者 lybio 的 10 个金币

lybio

金虫 (正式写手)

[交流] 质粒转入真菌,必须将其线性化吗?

大家好!构建好的质粒要与曲霉的基因组继续同源重组,采用PEG-原生质体法必须将它线性化才能转入吗?还是只要质粒就行?有人用过醋酸锂转染曲霉吗,它的优点是不是不需要制备原生质体,更方便?
我是采用PEG-原生质体法,用构建好的质粒PCR扩增出需要同源重组的基因片断,将它转入原生质体。反复做了5批,前3批都是用于摸索制备原生质体的条件,后两批均未转化出菌,很是着急。希望能够得到大家的帮忙,转化过程中还要注意什么,谢谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

pph0259

木虫 (正式写手)

★ ★
lybio(金币+2,VIP+0):谢谢,学习了!
不一定,线性DNA重组效率高于环形DNA,但是转化效率低了很多!
2楼2008-08-23 21:29:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyadxy

金虫 (小有名气)

★ ★
lybio(金币+2,VIP+0):谢谢提供的资料!
我看了日本人做的把锰过氧化物酶基因转到平菇中的文章是用质粒直接转的,用的也是原生质体PEG介导,你可以参考一下:
Molecular breeding of white rot fungus Pleurotus ostreatus by homologous expression of its versatile peroxidase MnP2
3楼2008-08-23 22:44:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

克隆大虾

铁杆木虫 (著名写手)

呵呵


lybio(金币+1,VIP+0):谢谢你的提意!
不一定线性化,你的问题是没长出菌,可能和原生质体再生率有关.
4楼2008-08-24 18:53:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):积极交流奖
我觉得原生质体再生率是有影响,但不会影响很大,使它菌都没长吧。首先通过镜检,制备的原生质体数量可达到10的6次方/ml,而且镜检基本上没有菌丝体。如果我将原生质体稀释10的3次方直接涂步在完全培养基中(转化的是营养缺陷型),能长的话,应该可以说明制得的原生质体再生率算还行吧。或者就直接做个计算再生率的实验。呃,试下再说吧,等结果出来再请教讨论
5楼2008-08-24 22:33:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 lybio 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +4 kulium 2026-08-21 5/250 2026-08-21 17:45 by Equinoxhua
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 10/500 2026-08-21 17:32 by chengyan1220
[基金申请] filecode,4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 14/700 2026-08-21 16:51 by applepetty
[基金申请] 让我中一个面上吧! +11 大萍1987 2026-08-20 13/650 2026-08-21 14:48 by 20120902066
[基金申请] 人气不行了 +7 fansofjerry 2026-08-21 7/350 2026-08-21 14:13 by Vivilian
[基金申请] 今日不放榜?网传国自然预计 8 月 27 日可查结果 +15 医学老男孩 2026-08-20 18/900 2026-08-21 13:46 by 医学老男孩
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +7 angus9576 2026-08-17 12/600 2026-08-21 13:38 by weiyin
[基金申请] 什么时候开奖? +7 CrisMessi 2026-08-18 7/350 2026-08-21 12:15 by weiyin
[基金申请] 今天基金会出结果吗?20260819 +15 kkkl_v 2026-08-19 16/800 2026-08-21 11:22 by 365372687
[基金申请] 科研孤儿太难了 +15 我4大白菜 2026-08-20 16/800 2026-08-21 11:07 by yming1319
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧? +4 哈哈蛤? 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 基金啊基金 +4 longfie172 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:58 by mark mao
[基金申请] 放榜前的不淡定 40+4 snowwithsea 2026-08-19 13/650 2026-08-21 08:30 by 北京莱茵编辑
[基金申请] 时间戳今天,20号变了 +4 archvillain 2026-08-20 4/200 2026-08-21 08:10 by gatelove
[基金申请] 时间戳变了,能看出什么问题? +18 基诺咪客 2026-08-17 23/1150 2026-08-20 17:19 by Godzela
[基金申请] 重要消息,中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低?主要原因有哪些? +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜吗? +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] 朋友圈看到的 +6 wangzilk 2026-08-18 8/400 2026-08-19 10:55 by Haru815
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
信息提示
请填处理意见