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王栋

铜虫 (小有名气)

[求助] 基因组DNA为模板进行PCR,第一次扩出来了,后面怎么重复都不行。已有12人参与

提取秀丽线虫基因组DNA,以此为模板进行PCR扩增,目的片段2300bp。使用Q5 高保真DNA聚合酶,25ul体系(7.25ul H2O+5ul 5×buffer+2ul 2.5mM dNTP+1.25ul上游引物+1.25ul下游引物+3ul 模板+5ul GC Enhancer+0.25ul Q5酶)。第一次扩增成功,但是之后模板用没了又重新提了3次基因组DNA,始终不能扩增出目的片段,退火温度从50度到72度都试过了,不行,Taq酶也试过了,不行。

基因组DNA为模板进行PCR,第一次扩出来了,后面怎么重复都不行。
第一次扩增成功(最上面那条带) .jpg


基因组DNA为模板进行PCR,第一次扩出来了,后面怎么重复都不行。-1
最初使用的条件.png


基因组DNA为模板进行PCR,第一次扩出来了,后面怎么重复都不行。-2
后来的结果就一直是这样的.png
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lingonghua

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2015-09-03 23:00:18
y引物不太匹配或降解,我们实验室学生也遇到过类似情况,重新合成引物试试
10楼2015-08-31 12:18:25
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