| 查看: 1614 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
【求助】PBMC怎么都没东西 已有2人参与
|
||
|
得先说说我的样品，比较特殊，人外周血，EDTA抗凝管收集后，将血浆和血细胞分离开，分装成500ul/冻存管，直接从室温或冰浴中冻存到-80度，最久的已经半年，最近的一个月。 PBMC分离方法： 1、2管血细胞，共1ml血细胞从-80度直接置于37度水浴； 2、1ml血细胞与2ml Hank's（无钙镁），轻轻混合均匀； 3、将上述稀释血溶液，缓慢延壁添加到1.5ml淋巴细胞分离液（购于北京索莱宝公司，200ml，115元）上，有清晰的分层界面； 4、1500rpm，20min（实验室没有水平离心机，只有普通离心机，加速度与减速度都是很低的）； 5、发现分层后的情况是这样的：第一层，大量的红色溶液，按理说应该是血浆，但是成红色，担心是红细胞破裂导致；第二层是分离液，量与第一层相当，甚至稍少于第一层；在第一层与第二层之间有一层浅浅的红色的溶液；第三层是红细胞，特别少，就只是盖住离心管底部，在红细胞上面有一层白色的东西，感觉棉棉的，像白细胞； 6、将第一层，第二层包括两层中间的那层均另外吸出来，再2500rpm，20min，发现底部有些絮状物； 7、吸弃6中的上清，加入5ml Hank's溶液，轻轻混合，1500rpm，10min； 8、重复7； 9、吸弃上清，加入500ul 细胞冻存液，用枪吹打几次； 10、20ul 0.2%台盼蓝+20ul 9中的细胞悬液，5min后，加到血球计数板上。 但是结果是完全没有，所以我想问题是否有可能是： 1、我的样品根本没有办法做PBMC，可能细胞全部破裂？ 2、红细胞上面那层白色的棉状物是否其实就是单核细胞，本应该在再上一层，所以我的离心机是不行的，或者是否可以离心速率再降低到1000rpm？ 3、其他可能性？ 实在很愁啊，都做了2次了，望各位实验大牛们，帮忙解答~ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有182人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
4楼2016-04-26 11:32:59
2楼2015-09-17 18:43:03
yglbuct
铜虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1168.7
- 红花: 2
- 帖子: 174
- 在线: 176.4小时
- 虫号: 1171342
- 注册: 2010-12-16
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤免疫
我们就是卖这个的，打个广告而已 3楼2015-12-22 15:21:09
5楼2016-06-21 15:56:31
50