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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 学术帮助 » 原核表达纯化蛋白问题
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只爱一个人

新虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达纯化蛋白问题

载体pet28a,诱导后蛋白上清表达量少，大部分已包涵体形式，用镍柱纯化后复性出现大量沉淀，复性率太低，考虑上清纯化，但是上清含量少不能纯化出纯度高的蛋白，怎么办，条带分别是MARK、过柱液、洗涤液、洗涤液、洗脱液、洗脱液、洗脱液、洗脱液、倒数第二是25度诱导上清、25度沉淀，目的蛋白大小是自后面那个最亮的

原核表达纯化蛋白问题
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1楼 2015-08-26 16:38:14
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your2007

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以考虑用蛋白质纯化仪试述，条件要反复摸索，才有望得到有生物活性的蛋白，或者考虑换载体，重新表达，祝好！
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爱人者被爱，敬人者人敬
2楼2015-08-29 13:08:52
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恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

原核蛋白表达纯化本来产生的大多数蛋白就是包涵体，上清蛋白表达技术主要就是利用条件矩阵的方法反复测试，耗时长才会有效。做过基因优化么？或者可以更换表达载体和表达系统——毕竟有些蛋白就是很难表达。。。
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早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
3楼2015-08-31 13:27:52
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只爱一个人

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-08-31 13:27:52
原核蛋白表达纯化本来产生的大多数蛋白就是包涵体，上清蛋白表达技术主要就是利用条件矩阵的方法反复测试，耗时长才会有效。做过基因优化么？或者可以更换表达载体和表达系统——毕竟有些蛋白就是很难表达。。。...

4楼2015-09-20 20:47:38
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0911095

新虫 (初入文坛)
可以降低诱导剂的量，或是换一些助溶性比较好的载体，或者和分子伴侣共表，帮助折叠，或是可以变复性.

发自小木虫IOS客户端
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5楼2015-09-23 20:16:30
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aegeantwo

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换载体、降低诱导温度，改变复性条件和方法，你是想做变复性还是想要上清表达？
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6楼2015-10-21 21:06:33
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