应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 网络生活区 » 有奖问答 » 学术帮助 » 原核表达纯化蛋白问题
61/1返回列表
查看: 1329  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

只爱一个人

新虫 (初入文坛)

[求助] 原核表达纯化蛋白问题

载体pet28a,诱导后蛋白上清表达量少，大部分已包涵体形式，用镍柱纯化后复性出现大量沉淀，复性率太低，考虑上清纯化，但是上清含量少不能纯化出纯度高的蛋白，怎么办，条带分别是MARK、过柱液、洗涤液、洗涤液、洗脱液、洗脱液、洗脱液、洗脱液、倒数第二是25度诱导上清、25度沉淀，目的蛋白大小是自后面那个最亮的

原核表达纯化蛋白问题
}TI6_1Z[$5(}7J4@H{3B0UT.png
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2015-08-26 16:38:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

your2007

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

可以考虑用蛋白质纯化仪试述，条件要反复摸索，才有望得到有生物活性的蛋白，或者考虑换载体，重新表达，祝好！
赞一下 回复此楼
爱人者被爱，敬人者人敬
2楼2015-08-29 13:08:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

恶魔的左眼

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

原核蛋白表达纯化本来产生的大多数蛋白就是包涵体，上清蛋白表达技术主要就是利用条件矩阵的方法反复测试，耗时长才会有效。做过基因优化么？或者可以更换表达载体和表达系统——毕竟有些蛋白就是很难表达。。。
赞一下 回复此楼
早上一副睡不醒的样子，下午一副没睡醒的样子，晚上一副打了鸡血的样子！
3楼2015-08-31 13:27:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

只爱一个人

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 恶魔的左眼 at 2015-08-31 13:27:52
原核蛋白表达纯化本来产生的大多数蛋白就是包涵体，上清蛋白表达技术主要就是利用条件矩阵的方法反复测试，耗时长才会有效。做过基因优化么？或者可以更换表达载体和表达系统——毕竟有些蛋白就是很难表达。。。...

4楼2015-09-20 20:47:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

0911095

新虫 (初入文坛)
可以降低诱导剂的量，或是换一些助溶性比较好的载体，或者和分子伴侣共表，帮助折叠，或是可以变复性.

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2015-09-23 20:16:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aegeantwo

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

换载体、降低诱导温度，改变复性条件和方法，你是想做变复性还是想要上清表达？
赞一下 回复此楼
6楼2015-10-21 21:06:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 只爱一个人 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:35 by LH5NkK5Ud4bh
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-16 05:27 by LH5NkK5Ud4bh
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 4/200 2026-09-16 04:11 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:59 by DgNGHc3h5tPl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 4/200 2026-09-16 03:23 by DgNGHc3h5tPl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-16 03:14 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +7 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 7/350 2026-09-16 02:35 by DgNGHc3h5tPl
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-16 02:14 by DgNGHc3h5tPl
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +6 两三岁ss 2026-09-14 6/300 2026-09-15 20:17 by 只吃肉葡萄
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:59 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 Aj1rhIDL5ixY 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:50 by CgyNCDVNhGVg
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 40ms4Wlo4umh 2026-09-14 3/150 2026-09-15 19:11 by CgyNCDVNhGVg
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +6 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 7/350 2026-09-15 16:47 by CgyNCDVNhGVg
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-15 16:35 by CgyNCDVNhGVg
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +6 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 6/300 2026-09-15 15:02 by CgyNCDVNhGVg
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 08:58 by C79jjtjAKjEn
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-15 07:46 by C79jjtjAKjEn
[博后之家] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 4/200 2026-09-14 23:24 by vZfe6xYu34yj
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭