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only123abc

银虫 (小有名气)

[求助] 做western blot 之前,需要给细胞48h的药和一定时间的生长因子,请问一般先给哪个? 已有1人参与

各位大神同僚,同上,做western blot 之前,需要给细胞48h的药和一定时间的生长因子,请问一般先给哪个?还有,生长因子的作用时间和浓度怎么确定??文献基本上是先给药,但是师姐和老师倾向于先给因子,怎么办??给药是抑制细胞各项生理功能,生长因子是激活各项功能,怎么做更科学?
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lubuddy

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
only123abc: 金币+10, ★★★★★最佳答案, 谢谢~文献是先给药的,但是我不明白原因,觉得先给因子激活细胞通路再给药抑制才是合理的,这个对不对呢? 2015-08-27 09:04:11
嗯,你这个问题很难回答的,因为别人不清楚你实验的目的和具体的设计。

建议你找及几篇比较经典权威的文献,和你的实验目的相似的照着他们的方法来。
2楼2015-08-26 23:37:54
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lubuddy

铁杆木虫 (正式写手)

我觉得可能是这样的,因为我经历过的抑制剂都是比较短时程的处理,一般不超过60分钟。但是我们一般都是先给抑制剂,比如我们要给EGF刺激,为了说明是EGF特异引起的作用,首先给予EGF的抑制剂(为了1、抑制剂对细胞发挥作用需要一定时间,必须先让抑制剂进入细胞发挥功效;2、将本底或内源的EGF也抑制住要先加抑制剂),然后再给予EGF。
3楼2015-09-02 10:54:21
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