应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 连接反应温度问题
51/1返回列表
查看: 1844  |  回复: 11
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前主题已经存档。
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

水草

[交流] 连接反应温度问题

我要做连接反应了，两个片段一个8000bp左右，一个4000bp左右，不知道最佳反应温度怎么确定。看资料有22度，14-16度，还有4度的。根据什么确定的反应温度呢？谢谢指教！
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2008-08-22 09:34:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

chysx6

铁杆木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
水草(金币+3,VIP+0):谢谢回答！
如果两个片段都很纯的话
正常配置连接体系
摩尔比 8000：4000=1：3
16度直接过夜或16度2-4小时然后4度过夜
基本都可以连接上
没什么特别的要求，应该很好连
赞一下(12人) 回复此楼
6楼2008-08-22 23:42:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答

jasco

木虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
水草(金币+2,VIP+0):谢谢！
最佳反应温度是依据连接酶活性而定的，跟你的片段没有关系，不过片段比较大，可以延长连接时间，并添加一点ATP来促进连接成功率
赞一下(14人) 回复此楼
2楼2008-08-22 09:51:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫
★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
水草(金币+3,VIP+0):谢谢回答！
添加ATP和PEG，并低温延长连接时间，这样可以提高连接的几率
赞一下(14人) 回复此楼
3楼2008-08-22 10:24:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heyi_zju

铜虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
水草(金币+3,VIP+0):感谢！
我是用TakaRa的试剂盒的话，用4度和16度都可以的，4度的话就是比较稳定，16度条件下比较快速，一般12hr左右就可以了。但是4度要2－3天时间。
除了添加ATP外，同时你还可以调整目的片段和载体的量。
赞一下(13人) 回复此楼
4楼2008-08-22 10:48:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 12 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:32 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 5/250 2026-11-11 04:23 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 6/300 2026-11-11 04:12 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 6/300 2026-11-11 03:56 by Z7qfCsdIiD1T
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 FChKX8meu1ds 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:54 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-11 01:24 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 0TEMgxdT1eIw 2026-11-09 6/300 2026-11-11 01:10 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 zSbvVX9JFl9J 2026-11-09 5/250 2026-11-11 00:59 by Z7qfCsdIiD1T
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 22:39 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 FChKX8meu1ds 2026-11-09 4/200 2026-11-10 20:51 by Z7qfCsdIiD1T
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 5/250 2026-11-10 20:12 by Z7qfCsdIiD1T
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 cqv1zKnzd7hr 2026-11-09 4/200 2026-11-10 20:07 by Z7qfCsdIiD1T
[考博] 申请环境，微生物方向博士 +3 浅笑09 2026-11-08 3/150 2026-11-10 12:44 by 可淡不可忘
[教师之家] 延安大学回应“副教授留绝笔信”：确已离世，正核实举报内容 +4 yexuqing 2026-11-04 6/300 2026-11-10 11:13 by susizheng
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 14/700 2026-11-09 11:52 by GwrQVVR6Oenx
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 16/800 2026-11-09 11:47 by GwrQVVR6Oenx
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 5sJFDKp2kwuI 2026-11-06 9/450 2026-11-08 22:46 by l48hFd8Nwae2
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 10/500 2026-11-06 16:12 by 5sJFDKp2kwuI
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +6 ttH3f1oA6ace 2026-11-04 12/600 2026-11-06 16:10 by 5sJFDKp2kwuI
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 hNpp4Y2CGvSC 2026-11-04 12/600 2026-11-06 01:53 by qL1cU46YIdK0
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭