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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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水草

[交流] 连接反应温度问题

我要做连接反应了,两个片段一个8000bp左右,一个4000bp左右,不知道最佳反应温度怎么确定。看资料有22度,14-16度,还有4度的。根据什么确定的反应温度呢?谢谢指教!
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫

★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
水草(金币+3,VIP+0):谢谢回答!
添加ATP和PEG,并低温延长连接时间,这样可以提高连接的几率
3楼2008-08-22 10:24:43
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
水草(金币+2,VIP+0):谢谢!
最佳反应温度是依据连接酶活性而定的,跟你的片段没有关系,不过片段比较大,可以延长连接时间,并添加一点ATP来促进连接成功率
2楼2008-08-22 09:51:08
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heyi_zju

铜虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
水草(金币+3,VIP+0):感谢!
我是用TakaRa的试剂盒的话,用4度和16度都可以的,4度的话就是比较稳定,16度条件下比较快速,一般12hr左右就可以了。但是4度要2-3天时间。
除了添加ATP外,同时你还可以调整目的片段和载体的量。
4楼2008-08-22 10:48:16
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
水草(金币+3,VIP+0):感谢回答!
16度就可以了, 不过你的外源片段比较大,可能要延长时间。但是连接还有其他的因素影响,例如你外源片段和载体浓度比例是否合理等等
5楼2008-08-22 10:50:17
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