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二代测序的问题 已有1人参与
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昨天刚接触二代测序，有很多问题不懂，可能大神会觉得这些问题很幼稚，但是 还是恳请能够详细回答一下 二代测序中 末端补平的作用是什么？ 割胶纯化这一步骤， DNA不是双链结构吗？如果是，那为什么需要留下连接完整的产物，去掉残缺不全的？而且，割胶会不会去掉接头？ |
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3楼2015-08-26 08:30:52
gaoyang636
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【答案】应助回帖
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sxfldn: 回帖置顶 2015-08-26 08:32:01
sxfldn: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-08-26 08:32:29
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sxfldn: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-08-26 08:32:29
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严谨一点的话，应该请你把你看的这个protocol发一下，才好解答。 目前我姑且认为你在问的是传统建库步骤的问题。 末端补平是因为前一步的物理打断步骤产生的DNA片段两端有可能为长短不一的粘端，需要先补平，再形成1bp的A碱基的小粘端，才能较高效地连接带T粘端的接头。 切胶是为了选择合适大小的DNA片段，与双链与否没啥特殊关系。并且理论上通过切胶一般也达不到”选择完整“”去除不全“的DNA片段的目的。 如果切胶选择的size比较大，可以比较有效的去除接头及二聚体。 PS：现在切胶用的少了，常用的是AMPure Beads磁珠处理。 |
2楼2015-08-25 10:32:11