24小时热门版块排行榜    

查看: 1720  |  回复: 2

sxfldn

新虫 (初入文坛)

[求助] 二代测序的问题 已有1人参与

昨天刚接触二代测序,有很多问题不懂,可能大神会觉得这些问题很幼稚,但是 还是恳请能够详细回答一下
二代测序中 末端补平的作用是什么?
割胶纯化这一步骤, DNA不是双链结构吗?如果是,那为什么需要留下连接完整的产物,去掉残缺不全的?而且,割胶会不会去掉接头?
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
sxfldn: 回帖置顶 2015-08-26 08:32:01
sxfldn: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2015-08-26 08:32:29
严谨一点的话,应该请你把你看的这个protocol发一下,才好解答。
目前我姑且认为你在问的是传统建库步骤的问题。

末端补平是因为前一步的物理打断步骤产生的DNA片段两端有可能为长短不一的粘端,需要先补平,再形成1bp的A碱基的小粘端,才能较高效地连接带T粘端的接头。

切胶是为了选择合适大小的DNA片段,与双链与否没啥特殊关系。并且理论上通过切胶一般也达不到”选择完整“”去除不全“的DNA片段的目的。

如果切胶选择的size比较大,可以比较有效的去除接头及二聚体。

PS:现在切胶用的少了,常用的是AMPure Beads磁珠处理。
2楼2015-08-25 10:32:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sxfldn

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2015-08-25 10:32:11
严谨一点的话,应该请你把你看的这个protocol发一下,才好解答。
目前我姑且认为你在问的是传统建库步骤的问题。

末端补平是因为前一步的物理打断步骤产生的DNA片段两端有可能为长短不一的粘端,需要先补平,再 ...

好  谢谢
3楼2015-08-26 08:30:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 sxfldn 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 为什么资助数各大高校都创新高,自己申请怎么就这么难 +6 Kittylucky 2026-08-27 6/300 2026-08-27 16:23 by l_zh2008
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+5) +9 晴天加油 2026-08-26 10/500 2026-08-27 16:20 by 443933501
[基金申请] 基金不中,共勉 +8 eulota 2026-08-26 8/400 2026-08-27 12:34 by lice_1987
[基金申请] 怎么看青基中了没有啊 +5 叶九微 2026-08-26 5/250 2026-08-27 10:35 by l_zh2008
[文学芳草园] 梦想 +3 myrtle 2026-08-26 3/150 2026-08-27 10:01 by angelyueyi
[基金申请] 让我中一个面上吧! +13 大萍1987 2026-08-20 17/850 2026-08-27 08:20 by 大萍1987
[基金申请] 怎么查啊 +5 huang1991js 2026-08-26 5/250 2026-08-26 16:09 by Equinoxhua
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +9 炎黄贵胄 2026-08-22 10/500 2026-08-26 15:40 by semaglutide
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 国合里面能看到了 +7 一怀馨秋 2026-08-26 7/350 2026-08-26 11:23 by zhaosm1982
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 今天务委会开完了,明天出结果吗 +19 angus9576 2026-08-25 23/1150 2026-08-26 10:03 by zp519
[基金申请] 国合现在查不到了吗? +10 chengyan1220 2026-08-24 20/1000 2026-08-26 08:57 by peasantsprig
[基金申请] 在坚冰还盖着北海的时候,我看到了怒放的梅花。 (金币+10) +6 ziyangfang 2026-08-25 9/450 2026-08-25 20:26 by huagongfeihu
[基金申请] 明天应该可查了!? +6 chengyan1220 2026-08-23 6/300 2026-08-25 19:45 by zfd97
[基金申请] 如果此刻你正在为国基感到焦虑,不妨来听听这首《基金之外》 +8 scalable 2026-08-24 8/400 2026-08-25 12:52 by jnhyjjm
[基金申请] 我面上完蛋了 +13 且听虎啸 2026-08-20 14/700 2026-08-25 09:10 by mrkang
[基金申请] 建议基金发布提前给出明确的时间点 +13 kulium 2026-08-21 16/800 2026-08-24 16:27 by superceng
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办? +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 看来今天不会放榜了? +8 chengyan1220 2026-08-21 11/550 2026-08-21 17:52 by dcqxinyang
信息提示
请填处理意见