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小木虫论坛-学术科研互动平台» 网络生活区» 有奖问答 » 有奖问答中转子版 » 有关Western blot 问题 截止日期08年8月30日
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coco_song

金虫 (正式写手)

[交流] 有关Western blot 问题 截止日期08年8月30日

本人今天做Western blot 时,显影结果跟平时的相反:有条带的地方是白色,背景是一片黑.而平时抗体好的话,只出现一条黑色的目的带,请问怎么解释这个现象.

[ Last edited by coco_song on 2008-8-23 at 20:58 ]
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1楼 2008-08-21 20:32:36
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conanthird

金虫 (著名写手)
★ ★
coco_song(金币+2,VIP+0):xiexie
Something wrong with the film.
I think the film has been exposure to the light.
It has nothing to do with the secondary antibodies.
You need to buy some new films and open them in the dark to avoid exposure.
Good luck.

[ Last edited by conanthird on 2008-8-21 at 20:54 ]
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2楼2008-08-21 20:53:17
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beckham277

木虫 (职业作家)
你显影时估计是曝光了
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3楼2008-08-22 10:18:40
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coco_song

金虫 (正式写手)
我说的背景一片黑是和膜大小的地方，没有膜的地方还是白色的呀，应该不是胶片被曝光了
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4楼2008-08-22 10:33:03
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coco_song

金虫 (正式写手)
我说的背景一片黑是和膜大小的地方，没有膜的地方还是白色的呀，应该不是胶片被曝光了
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5楼2008-08-22 10:36:52
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hyy9057

★ ★ ★
coco_song(金币+3,VIP+0):谢谢！
可能是你的一抗浓度较高，二抗上HRP催化活力太强，同时你的显色底物处于一个临界点，反应时间不长，将周围底物催化完，形成了空白。将一抗和二抗的浓度降低，或更换新底物
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6楼2008-08-22 22:00:58
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zjin_mei

铁虫 (初入文坛)
我也遇到过这种情况，原因可能是由于样本上样量太大，减少上样量试试
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7楼2008-08-26 23:16:33
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lovelife5967

银虫 (小有名气)
如果是western的老手，一般不会出现流程操作上的失误。如果是用化学发光显色系统的话，可以考虑是不是发光时的镜头没用对，拍照的方法搞错了，会形成反向曝光。我有个学生出现过这样的事情。
希望能对你有帮助。
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8楼2008-08-27 08:03:59
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