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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 什么都回收不到是怎么回事呢，谢谢
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helenfang

铜虫 (小有名气)

[交流] 什么都回收不到是怎么回事呢，谢谢

请问各位高手：我这只克隆菜鸟，今天居然把条带给回收没了。从PCR产物中割胶回收，因是随机引物P的，有很多条带，割胶的时候要很小心，也多耽搁了些时间，但最后还是在紫外灯下确定了一下那条带还是挺亮的，用博大的回收试剂盒回收完跑完电泳居然什么都没有，各位能不能告诉可能是什么原因呢，郁闷死了，一天的实验白做了。。。
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1楼 2008-08-21 20:24:42
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享，欢迎常来
晕，回收的时候确定是按照说明书上做的？
最后洗脱的时候预热没？
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2楼2008-08-21 20:57:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):代谢
有时候可能是回收率太低导致的……我也试过回收完什么都没有，用国产的垃圾试剂盒做的
测下OD看看到底剩下多少DNA……
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3楼2008-08-22 00:19:51
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zyk_527

银虫 (小有名气)
我也遇到过这种情况，相信自己的操作继续往下做，一样也做出来了
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4楼2008-08-22 08:38:41
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jasco

木虫 (正式写手)
★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
你要回收的片段大小是？小于100bp的片段，只有qiagen的回收试剂盒能胜任，且回收率也不高，其他盒子没有保障。
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5楼2008-08-22 09:53:20
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫
同意楼上的，再就是确认自己的操作没有问题
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6楼2008-08-22 10:22:27
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dxz560123

铜虫 (初入文坛)
如果是小片段需加异丙醇
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7楼2008-08-22 10:26:20
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)
★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):thx
回收胶呢有很多的原因会影响回收效率：
1.你的胶要做的厚度合适，能刚好把所有的样品都点下，有没有过多的剩余空间。
2.电泳缓冲液也要新配的，或新稀释的。
3.你初始的样品的浓度量要达到，本来就不太大的量，回收回来也不会很多。
4.在紫外照胶的时候，要快，切胶的时候不要打开紫外，那样会损失很多。
5.水要预热，回收的时候按说明书操作。
6.建议最好用TaKaRa的盒子，其他公司基本靠不住。
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8楼2008-08-22 10:59:06
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helenfang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by weigh1111 at 2008-8-21 20:57:
晕，回收的时候确定是按照说明书上做的？
最后洗脱的时候预热没？

是的呀，预热了，我用预热的灭菌双蒸水洗脱的，不过说明书上说用去离子水来洗脱的时候要保证pH在8.0左右，说pH对回收效率有重要影响，这个pH我不能保证。
谢谢。。。。。。
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9楼2008-08-22 14:30:55
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helenfang

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by zyk_527 at 2008-8-22 08:38:
我也遇到过这种情况，相信自己的操作继续往下做，一样也做出来了

是吗，你的意思是不管电泳有无条带接着做连接吗，这样也能行的？
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10楼2008-08-22 14:32:45
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