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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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helenfang

铜虫 (小有名气)

[交流] 什么都回收不到是怎么回事呢,谢谢

请问各位高手:我这只克隆菜鸟,今天居然把条带给回收没了。从PCR产物中割胶回收,因是随机引物P的,有很多条带,割胶的时候要很小心,也多耽搁了些时间,但最后还是在紫外灯下确定了一下那条带还是挺亮的,用博大的回收试剂盒回收完跑完电泳居然什么都没有,各位能不能告诉可能是什么原因呢,郁闷死了,一天的实验白做了。。。
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weigh1111

铁杆木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):谢谢分享,欢迎常来
晕,回收的时候确定是按照说明书上做的?
最后洗脱的时候预热没?
2楼2008-08-21 20:57:13
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):代谢
有时候可能是回收率太低导致的……我也试过回收完什么都没有,用国产的垃圾试剂盒做的
测下OD看看到底剩下多少DNA……
3楼2008-08-22 00:19:51
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zyk_527

银虫 (小有名气)

我也遇到过这种情况,相信自己的操作继续往下做,一样也做出来了
4楼2008-08-22 08:38:41
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jasco

木虫 (正式写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
你要回收的片段大小是?小于100bp的片段,只有qiagen的回收试剂盒能胜任,且回收率也不高,其他盒子没有保障。
5楼2008-08-22 09:53:20
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jukongka

铁杆木虫 (著名写手)

年度最忠心木虫

同意楼上的,再就是确认自己的操作没有问题
6楼2008-08-22 10:22:27
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dxz560123

铜虫 (初入文坛)

如果是小片段需加异丙醇
7楼2008-08-22 10:26:20
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snzydong

铁杆木虫 (著名写手)

★ ★ ★ ★
reasonspare(金币+4,VIP+0):thx
回收胶呢有很多的原因会影响回收效率:
1.你的胶要做的厚度合适,能刚好把所有的样品都点下,有没有过多的剩余空间。
2.电泳缓冲液也要新配的,或新稀释的。
3.你初始的样品的浓度量要达到,本来就不太大的量,回收回来也不会很多。
4.在紫外照胶的时候,要快,切胶的时候不要打开紫外,那样会损失很多。
5.水要预热,回收的时候按说明书操作。
6.建议最好用TaKaRa的盒子,其他公司基本靠不住。
8楼2008-08-22 10:59:06
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helenfang

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by weigh1111 at 2008-8-21 20:57:
晕,回收的时候确定是按照说明书上做的?
最后洗脱的时候预热没?

是的呀,预热了,我用预热的灭菌双蒸水洗脱的,不过说明书上说用去离子水来洗脱的时候要保证pH在8.0左右,说pH对回收效率有重要影响,这个pH我不能保证。
谢谢。。。。。。
9楼2008-08-22 14:30:55
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helenfang

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by zyk_527 at 2008-8-22 08:38:
我也遇到过这种情况,相信自己的操作继续往下做,一样也做出来了

是吗,你的意思是不管电泳有无条带接着做连接吗,这样也能行的?
10楼2008-08-22 14:32:45
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