24小时热门版块排行榜    

查看: 553  |  回复: 18
当前主题已经存档。

helenfang

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by jasco at 2008-8-22 09:53:
你要回收的片段大小是?小于100bp的片段,只有qiagen的回收试剂盒能胜任,且回收率也不高,其他盒子没有保障。

大概650bp左右,应该是比较好回收的吧
11楼2008-08-22 14:33:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

helenfang

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
Originally posted by snzydong at 2008-8-22 10:59:
回收胶呢有很多的原因会影响回收效率:
1.你的胶要做的厚度合适,能刚好把所有的样品都点下,有没有过多的剩余空间。
2.电泳缓冲液也要新配的,或新稀释的。
3.你初始的样品的浓度量要达到,本来就不太大的量, ...

因为条带较多,在目的条带附近就有一条,所以切胶的时间可能是多花了点时间。
我今天打算再做一次回收,用Axygen回收试剂盒再试一次,上次做其他片段回收的时候用这个用的还挺好的,那个用完了就用了这个博大的一个试用装做了,结果。。。
真的非常感谢热心帮助。
12楼2008-08-22 14:38:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

helenfang

铜虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):积极交流奖
非常感谢各位,虽说做个回收、克隆之类的很多人都会,而且也还简单,在这个论坛里也是老生常谈,但对于新手来说可能经验比较欠缺,结果出了问题自己真的不太能分析,在这里这么多人参加讨论下让我受益匪浅,真的非常感谢的。
今天再做一次回收,用Axygen的试剂盒再试一次,看结果如何,到时候再过来汇报。
13楼2008-08-22 14:41:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

xiaoyadxy

金虫 (小有名气)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
可能是试剂盒回收率太低,建议你换个可靠的盒子。
你电泳点样多少啊?点的少了就是没条带。
我们也遇见过同样问题,后来测了一下DNA浓度,还是有的,40多ng/ul。就往下做了,还可以用。
14楼2008-08-22 20:02:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

skkyy88888

铜虫 (著名写手)

★ ★
reasonspare(金币+2,VIP+0):thx
60度融完胶了要冷却后再上柱子.效果较好.
15楼2008-08-22 20:25:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

connexin

金虫 (小有名气)

博大的试剂盒我也出现过这种情况,它的柱子可能有点问题。建议用TAKARA,一般很稳定。
16楼2008-08-23 10:23:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

helenfang

铜虫 (小有名气)

昨天将博大试剂盒回收产物再进行了PCR,电泳发现还是有条带的,说明浓度太低了以致电泳都检测不到。我又用Axygen的做了一次回收,电泳检测还是有条带的,虽然浓度也不是很大,可能博大的回收率不高。
17楼2008-08-23 10:47:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

helenfang

铜虫 (小有名气)

另外我想请问下大家,如果我的回收产物浓度较低,是不是最好将回收产物再进行一次PCR,再接着做连接呢,连接体系中加入的PCR回收产物的量是按照什么原则来计算的,非常感谢
18楼2008-08-23 10:49:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lybio

金虫 (正式写手)

★ ★
xyklmu(金币+2,VIP+0):感谢答复,积极交流
回收产物再次PCR,产生的错配会增多。回收产物浓度低,你可以多做几管再回收。还有你问的最后一步用水的PH问题,可以不管水的PH值,直接用灭菌DDW即可。但得率是否会因此降低,这就不知道了
19楼2008-08-23 16:22:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 helenfang 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
信息提示
请填处理意见