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T克隆连接，迟迟连接不上
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小弟的载体使用自己改造过的质粒PYA4278，用AhdI酶切后露出的是T末端，载体大小为5160bp，目的片段是重叠后的产物，左臂+SPC+右臂=2568bp，使用天根的一般taq酶72℃延伸30min，16℃连接过夜，用宝生物的solutionI连接,隔天使用Ca转，所转感受态为自己制备的沙门氏菌的感受态。别人的同时做，使用同样的感受态都连接成功了，我的却迟迟连不上，不知道是什么原因，还请各位大神帮忙分析一下。 连接首先测定浓度，然后按照摩尔比1：1进行计算后添加连接，连接体系为10ul。 |
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